NLuc熒光素酶檢測試劑盒

1、自備材料：
PBS；多道排槍；白色不透光/黑色細胞培養板；化學發光儀或酶標儀。
2、檢測前準備：
（1）預先將NLuc檢測底物（50×）和NLuc檢測底物緩沖液放置于室溫。
（2）根據實際使用量，以1:50的比例將適量的NLuc檢測底物（50×）與NLuc檢測底物緩沖液混勻，室溫避光備用。例如：如果需要10 mL反應液，則需要加入0.2 mL的檢測底物。
注：建議現配現用，剩余的含有新型底物的反應液在當次實驗結束后不建議留存。
3、操作方法：
（1）從細胞培養箱中取出細胞培養板，放置5-15 min，恢復至室溫。
注：使用白色不透光或者黑色的細胞培養板，減少孔間的信號干擾。
（2）加入檢測溶液
使用多道排槍向每個細胞孔中加入平衡至室溫的含有底物的反應液，加樣體積與細胞培養液體積相同并混勻。例如，96孔板通常加入80-100μL 培養液，相應加入80μL-100μL檢測溶液；384孔板通常加入20-30μL 培養液，相應加入20-30μL檢測溶液。
（3）發光檢測
混勻后于化學發光儀或酶標儀中檢測NLuc熒光素酶報告基因活性。
注：為得到最佳檢測結果，請在加入檢測試劑后1小時內完成檢測。
4、分析數據：
（1）實驗設計：根據不同實驗目的，在每個培養板中都應設置對照組、實驗組和空白對照組。為了保證實驗準確性，理論上每個實驗組（包括對照組）都應當減去空白對照組的螢火蟲螢光素酶的發光測量值。
①空白對照組：
背景F：未轉染細胞+反應液。
注：空白對照組的樣品量必須與實驗樣品量相同，包含與實驗樣品相同的培養基/血清組合，并加上相同的檢測試劑。
②實驗組：轉染細胞經實驗化合物處理（即實驗組F）。
③對照組：轉染細胞不經處理，用以標準化結果（即對照組F）。
（2）計算結果：
實驗組=實驗組F-背景F。
對照組=對照組F-背景F。
表達倍數=實驗組/對照組。

-20℃保存，有效期一年。NLuc檢測底物（50×）建議分裝-80℃保存。

1、酶促反應對溫度較為敏感，加樣檢測前務必將所有試劑平衡至室溫（20-25 ℃）再使用；
2、檢測時需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板，相鄰孔之間會產生相互干擾；
3、檢測儀器：能檢測化學發光的儀器都適用，但由于不同儀器的設置和靈敏度不同，測得的光信號值也會不同；
4、單管熒光測定儀測定，每個樣品與測定試劑混合后到測定前的時間應保持一致；
5、為了您的自身安全，實驗前請做好有效防護；