Lipofect5000 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑

產(chǎn)品描述：

Lipofect5000是在研究了國外同類產(chǎn)品性能的基礎(chǔ)上開發(fā)的一款高性能通用型核酸轉(zhuǎn)染試劑，適用于將質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染入哺乳動(dòng)物細(xì)胞。Lipofect5000具有非常優(yōu)異的轉(zhuǎn)染性能，可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)貼壁細(xì)胞和部分懸浮細(xì)胞。在貼壁培養(yǎng)的AAV293細(xì)胞中，Lipofect5000質(zhì)粒DNA（EGFP質(zhì)粒）的轉(zhuǎn)染陽性率可高達(dá)90%以上，即使對(duì)于較難轉(zhuǎn)染的RAW264.7細(xì)胞，Lipofect5000的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染陽性率也可高達(dá)70%。與部分國際品牌相比，Lipofect5000擁有更高的DNA轉(zhuǎn)染性能，價(jià)格也親和，是進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的理想選擇。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1、可高效轉(zhuǎn)染多種貼壁細(xì)胞和部分懸浮細(xì)胞等，在貼壁細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染陽性率可高達(dá)90%以上。
2、 顯著的性價(jià)比優(yōu)勢(shì)，轉(zhuǎn)染性能顯著優(yōu)于部分國際品牌而價(jià)格不足其30%。

產(chǎn)品組分：

應(yīng)用：

適用細(xì)胞系：HeLa,Huh-7，CCD-14Br，SBC-1,A-172，NB-1,COS-7,293T,人肝細(xì)胞，原代大鼠肝細(xì)胞，雞胚胎心肌細(xì)胞等。

貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法步驟（以24孔板轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA為例）:

A、細(xì)胞接種：
1、 轉(zhuǎn)染前一天將細(xì)胞鋪板（使用不含抗生素的培養(yǎng)基），每孔1.5-2.0×105個(gè)細(xì)胞左右，使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度為80%；
2、最好在轉(zhuǎn)染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基，以防轉(zhuǎn)染后孵育階段細(xì)胞密度太大、營(yíng)養(yǎng)不足導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

B、Lipofect5000/DNA復(fù)合物包裝（該步完成后應(yīng)立即進(jìn)行轉(zhuǎn)染）：
 1、在1.5ml無菌離心管中加入50ul Trans buffer，并添加適量的DNA（參見附表），用移液器輕輕混勻成DNA稀釋液。
2、使用前混勻轉(zhuǎn)染試劑，立即往DNA稀釋液中添加適量的轉(zhuǎn)染試劑，用移液器輕輕混勻。
3、將Lipofect5000/DNA混合物室溫靜置15分鐘后，立即轉(zhuǎn)染。
注意：離心管最好使用聚丙烯離心管。

C、轉(zhuǎn)染：
1、將步驟B制備的復(fù)合物滴加至細(xì)胞培養(yǎng)孔中。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板以使復(fù)合物均勻分布。
2、 培養(yǎng)24小時(shí)后即可觀察，但最佳觀察時(shí)間為36小時(shí)。如果需要，細(xì)胞培養(yǎng)6-24小時(shí)后可以更換新鮮培養(yǎng)基，但不是必須。
3、 收獲細(xì)胞，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，在轉(zhuǎn)染24-48小時(shí)后，用選擇培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)。

儲(chǔ)存/保存方法：

4-8°C 保存，有效期一年，使用前請(qǐng)輕輕混勻。

技術(shù)指標(biāo)：

附 貼壁細(xì)胞培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件：

注意事項(xiàng)：

1、剛開始使用，建議進(jìn)行細(xì)胞密度優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，如可在培養(yǎng)板中分別接種1.5×105、2.0×105、2.5×105個(gè)細(xì)胞，分別進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)染，以選擇出轉(zhuǎn)染效果較好的細(xì)胞接種密度。
2、應(yīng)避免轉(zhuǎn)染復(fù)合物中存在血清，因?yàn)檠鍟?huì)干擾轉(zhuǎn)試劑與DNA形成復(fù)合物，在轉(zhuǎn)染過程中不要向培養(yǎng)基中添加抗生素。

溫馨提示：本產(chǎn)品僅作科研實(shí)驗(yàn)使用，不支持臨床等研究