核酸共轉(zhuǎn)染試劑

產(chǎn)品介紹：

核酸共轉(zhuǎn)染試劑盒是我們研發(fā)的專門用于將質(zhì)粒 DNA、siRNA 或 mimics 共同轉(zhuǎn)染于同一細(xì)胞的試劑盒。它具有非常好的轉(zhuǎn)染性能，可將質(zhì)粒 DNA 和 siRNA 高效地共轉(zhuǎn)染于絕大多數(shù)貼壁細(xì)胞和原代細(xì)胞。在貼壁細(xì)胞中，質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染效率可高達(dá) 90%以上，siRNA 在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染陽(yáng)性細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染效率可高達(dá) 95%以上。其功能強(qiáng)大，不僅可高效轉(zhuǎn)染質(zhì)粒 DNA 和 siRNA，還可高效轉(zhuǎn)染 mRNA、mimics、反義核酸和各種小分子 DNA。與目前市場(chǎng)上常見(jiàn)的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑不同，我們的共轉(zhuǎn)染試劑 采用生物可降解材料配制，對(duì)細(xì)胞的毒性很低，轉(zhuǎn)染后 24 小時(shí)細(xì)胞死亡率不到 10%。使用也非常方便，先將轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒 DNA 和 siRNA 混合，再將該轉(zhuǎn)染復(fù)合物直接加入培養(yǎng)細(xì)胞中，血清不影響其轉(zhuǎn)染效果，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液，操作十分簡(jiǎn)便。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、強(qiáng)大的質(zhì)粒DNA與siRNA共轉(zhuǎn)染性能，可高效轉(zhuǎn)染多種貼壁細(xì)胞和原代細(xì)胞，質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率在貼壁細(xì)胞中可高達(dá)90%以上，siRNA在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染陽(yáng)性細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染效率高達(dá)95%以上；
2、共轉(zhuǎn)染功能強(qiáng)大，不僅可將質(zhì)粒DNA與siRNA共轉(zhuǎn)染于同一細(xì)胞，還可共轉(zhuǎn)染mRNA、mimics、反義核酸于同一細(xì)胞；
3、極低的細(xì)胞毒性：使用可降解生物材料，細(xì)胞毒性低，轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%，大大降低了因細(xì)胞毒性對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

操作步驟（以 24 孔板轉(zhuǎn)染為例）:

A、 細(xì)胞接種:
1、轉(zhuǎn)染前一天對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)接，每孔接種1.5×105個(gè)細(xì)胞，使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度為80-90%，且生長(zhǎng)良好（非常重要）；
2、 最好在轉(zhuǎn)染開(kāi)始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基，以防轉(zhuǎn)染后孵育階段細(xì)胞密度太大、營(yíng)養(yǎng)不足導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

B、試劑A轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備（該步完成后應(yīng)立即進(jìn)行轉(zhuǎn)染）：
1、在1.5 ml無(wú)菌離心管中加入50µl無(wú)血清培養(yǎng)基，再加入適量的轉(zhuǎn)染試劑，見(jiàn)附表。用移液器輕輕混勻，室溫靜置5分鐘。
2、在1.5 ml無(wú)菌離心管中加入50µl無(wú)血清培養(yǎng)基，再加入適量的DNA，輕輕混勻，之后再加入適量的siRNA，見(jiàn)附表。用移液器再次輕輕 混勻，室溫靜置5分鐘。
3、將DNA-siRNA-培養(yǎng)基混合物滴加至試劑A-培養(yǎng)基混合物中，用移液器輕輕混勻，室溫靜置15~20分鐘，立即轉(zhuǎn)染。注意：試劑A-培養(yǎng)基混合物和DNA-siRNA-培養(yǎng)基混合物的混合次序非常重要，切勿顛倒。注意：離心管最好使用聚丙烯離心管。

C、轉(zhuǎn)染:
1、將步驟B制備的轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中，邊加邊輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板以使復(fù)合物均勻分布。加完后，立即將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
2、 培養(yǎng)24-48小時(shí)后觀察或進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
3、試劑A在培養(yǎng)基中仍有較高的轉(zhuǎn)染效率，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無(wú)血清或低血清培養(yǎng)基。

附表 1：不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件

儲(chǔ)存/保存方法：

-20°C 保存，有效期一年，使用前請(qǐng)輕輕混勻。

注意事項(xiàng)：

1、剛開(kāi)始轉(zhuǎn)染，請(qǐng)務(wù)必進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，如24孔板質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，每孔質(zhì)粒用量0.8ug，siRNA用量15pmol，試劑A可選擇2.0ul、2.5ul、3.0ul進(jìn)行優(yōu)化。或者，每孔質(zhì)粒用量0.8ug，試劑A用量2.5ul，siRNA用量選擇10pmol、15pmol、20pmol、25pmol進(jìn)行優(yōu)化。
2、在制備DNA-siRNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)，應(yīng)避免體系中存在血清，因血清會(huì)干擾試劑A與DNA、siRNA形成復(fù)合物。培養(yǎng)體系中盡量不要添加抗生素，抗生素會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)細(xì)胞死亡。

**溫馨提示：本產(chǎn)品僅作科研實(shí)驗(yàn)使用，不支持臨床等研究