核酸轉染試劑盒

產品介紹：
該產品是我司在Plasmid Transfection Reagent的基礎上進一步研發成功的專門用于核酸高效轉染的試劑盒。它具有非常好的轉染性能，可高效轉染絕大多數貼壁細胞，轉染效率可高達90%以上（Hela細胞，EGFP質粒）。其功能強大，不僅可高效轉染較大分子的質粒DNA，還可高效轉染mRNA、siRNA、mimics和各種小分子DNA。

與目前市場上常見的脂質體轉染試劑不同，該試劑盒采用生物可降解材料配制，對細胞的毒性很低，轉染后24小時細胞幾乎無明顯死亡。它使用也非常方便，先將轉染試劑與質粒DNA混合，再將轉染試劑-DNA復合物直接加入培養細胞中，血清不影響其轉染效果，不必刻意添加或更換培養液，操作十分簡便。它適合于貼壁細胞的核酸轉染，如需轉染原代細胞，請選擇原代細胞核酸轉染試劑盒（abs60324）。如需轉染懸浮細胞，請選擇懸浮細胞核酸轉染試劑盒（abs60325）。

產品特點：
1、強大的細胞轉染性能：可高效轉染多種貼壁細胞，轉染效率在貼壁細胞中可高達90%以上；
2、轉染功能強大，不僅可高效轉染大分子質粒DNA，還可高效轉染mRNA、siRNA、mimics和各種小分子DNA；
3、極低的細胞毒性：使用可降解生物材料，細胞毒性低，轉染細胞死亡率不到10%，大大降低了因細胞毒性對實驗結果的影響；
4、操作簡便，可用于含血清培養基培養細胞的轉染，轉染前后不需要更換培養液。

試劑盒包裝：

轉染效率：可高效轉染多種貼壁細胞，轉染效率在貼壁細胞中可高達90%以上；
細胞死亡率：死亡率不到10%

操作步驟：

一、質粒DNA轉染（以24孔板轉染為例）:

A、細胞接種:
1、轉染前一天對細胞進行轉接，每孔接種0.8-1.2×105個細胞，使轉染時細胞密度為90%左右，且生長良好（非常重要）；
2、最好在轉染開始之前更換新鮮的含血清培養基，以防轉染后孵育階段細胞密度太大、營養不足導致細胞死亡。

B、試劑B /DNA轉染復合物制備(該步完成后應立即進行轉染):
1、在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul無血清培養基，再加入適量的轉染試劑，見附表。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。
2、在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul無血清培養基，并加入適量的試劑A，輕輕混勻，再加入適量的DNA，見附表。用移液器再次輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。
3、 將DNA-培養基混合物滴加至試劑B-培養基混合物中，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15-20分鐘后，立即轉染。注意： 試劑B-培養基混合物和DNA-培養基混合物的混合次序非常重要，切勿顛倒。
注意：離心管最好使用聚丙烯離心管。

C、轉染:
1、將步驟B制備的轉染復合物滴加至培養基中，邊加邊輕輕晃動培養板以使復合物均勻分布。加完后，立即將培養板轉入培養箱繼續培養。
2、培養12小時后即可觀察，最佳觀察或收獲時間為24-48小時。
3、試劑B在培養基中仍有較高的轉染效率，因此轉染前后不需要換成無血清或低血清培養基。

二、siRNA轉染（以24孔板轉染為例）:

A、 細胞接種:
1、轉染前一天對細胞進行轉接，使轉染時細胞密度為30-50%左右，且生長良好、無支原體污染（非常重要）；
2、 最好在轉染開始之前更換新鮮的含血清培養基，以防轉染后孵育階段細胞密度太大、營養不足導致細胞死亡。

B、試劑B /siRNA轉染復合物制備 (該步完成后應立即轉染):
1、 在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul無血清培養基，并添加適量的轉染試劑(見下表) 。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。
2、 在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul無血清培養基，并添加適量的siRNA（見下表），用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。
3、將siRNA-培養基混合物滴加至試劑B-培養基混合物中，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15-20分鐘后，立即轉染。

C、轉染:
1、將步驟B制備的轉染復合物滴加至培養基中，邊加邊輕輕晃動培養板。加完后，立即將培養板轉入培養箱繼續培養。
2、37°C培養24-72小時，檢測基因抑制效果。如果需要，細胞培養4-6小時可以更換培養基，但不是必須。
3、 試劑B 在培養基中仍有較高的轉染效率，因此轉染前后不需要換成無血清或低血清培養基。

儲存/保存方法：

-20°C 保存，使用前請輕輕混勻；有效期1年。

技術指標：

附表 1：質粒轉染不同培養體系推薦初始轉染條件

附表 2：siRNA 轉染不同培養體系推薦初始轉染條件

產品用途：

可高效轉染絕大多數貼壁細胞，轉染效率可高達90%以上（Hela細胞，EGFP質粒）。試劑A功能強大，不僅可高效轉染較大分子的質粒DNA，還可高效轉染mRNA、siRNA、mimics和各種小分子DNA。

注意事項：

1、剛開始轉染，請務必進行優化實驗，如24孔板質粒轉染，每孔質粒用量0.8 ug， 試劑B 可選擇2.0 ul、2.5 ul、3.0 ul、3.5 ul進行優化。24孔板siRNA轉染，試劑B 用量2.0 ul，siRNA用量可選10 pmol、20 pmol、30 pmol、40 pmol進行優化。
2、 在制備DNA或siRNA轉染復合物時，應避免體系中存在血清，因血清會干擾試劑B 與DNA或siRNA形成復合物。培養體系中盡量不要添加抗生素，抗生素會導致培養細胞死亡。
3、試劑A僅用于質粒轉染，RNA或siRNA轉染不需加入試劑A。
4、 請注意質粒轉染和siRNA轉染時對細胞密度和轉染試劑用量等條件的差異，不要混用同一條件。
5、如果需要質粒穩轉，請在轉染24-48小時后加入篩選培養基。
6、 本產品適合于質粒DNA、siRNA分別獨立轉染，如需質粒DNA、siRNA共轉，請選用核酸共轉染試劑盒。
本產品僅用于科學研究，不得用于醫學臨床用途。

*溫馨提示：本產品僅作科研實驗使用，不支持臨床等研究