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                • 針對抗體常見問題Q:做細胞信號傳導,要做磷酸化某因子WesternBlot,其二抗有何要求?A:對二抗有無要求,要看你實驗條件來選擇,一般推薦用HRP標記的二抗。Q:免疫組化和WesternBlot可以用同一種抗體嗎?A:免疫組化時抗體識別的是未經變性處理的抗原決定簇(又稱表位),有些表位是線性的,而有的屬于構象型;線性表位不受蛋白變性的影響,天然蛋白和煮后的蛋白都含有;構象型表位由于受蛋白空間結構限制,煮后變性會消失。如果你所用的抗體識別的是蛋白上連續(xù)的幾個氨基酸,也就是線...

                  2018-04-24
                • 針對樣品的常見問題:Q:細胞水平要做WesternBlot,多少細胞提的蛋白夠WesternBlot?A:一般地5*106就足夠了。Q:同一樣品能同時提RNA又提蛋白嗎,這樣對WesternBlot有無影響?A:能,沒有問題的。Q:同一蛋白樣品能同時進行兩種因子的WesternBlot檢測嗎?A:當然可以,有的甚至可以同時測幾十種樣品。Q:如果目標蛋白是膜蛋白或是胞漿蛋白,操作需要注意什么?A:如果是膜蛋白和胞漿蛋白,所用的去垢劑就要溫和得多,這時建議加上NaF去抑制磷酸化酶...

                  2018-04-24
                • Western免疫印跡(WesternBlot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。我們將通過以下幾個方面來詳細地介紹一下WesternBlot技術:【原理】與Southern或Northern雜交方法類似,但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質,“探針”是抗體,“顯色”用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(例如PVDF膜)上...

                  2018-04-24
                • 預染蛋白marker是WesternBlot實驗中常用的一種試劑,那么預染蛋白marker到底是什么?用的時候又有哪些注意事項呢?預染蛋白marker其實就是一些純化好的蛋白混合物,通過與染料共價耦聯(lián),在電泳過程中或者轉膜時可以直接觀察到。預染蛋白marker的出現(xiàn)方便了我們的實驗,可以幫助我們在電泳時、電泳后,以及轉膜后監(jiān)測電泳情況和估計遷移率。比如使用垂直電泳時*分辨區(qū)域大約在膠的2/3處,我們使用預染Marker就可以預測電泳的進程。當目標蛋白進入*分辨區(qū)時就可以停止電...

                  2018-04-18
                • 愛科研,必信它!科研百寶箱生化試劑領域專家,愛必信(Absin®)重磅推出信號通路明星小分子抑制劑!作為愛必信生化試劑產品線的補充版,明星小分子抑制劑系列延續(xù)了愛必信質量可靠,,產品全面的優(yōu)勢,實現(xiàn)了對愛必信生化試劑的有力補充,更好地滿足廣大科研工作者的需要。愛必信,以親和力的價格,豐富全面的產品線,快速的售后服務為用戶提供質量可靠的小分子抑制劑!產品特點:☆質量可靠,提供高純度的化合物!☆產品豐富全面,超過5000種抑制劑可供選擇!☆確保再次供應!☆規(guī)格包裝靈活,可...

                  2018-04-10
                • Forskolin在不與細胞表面受體相互作用前提下刺激腺苷酸環(huán)化酶活性。在脂肪細胞中Forskolin's促進cAMP產生進而可以抑制嗜堿性粒細胞和肥大細胞脫顆粒作用以及組胺釋放,降低血壓、眼內壓,抑制血小板聚集,促進血管舒張,支氣管擴張和甲狀腺激素分泌,刺激脂肪分解。Forskolin抑制血小板活化因子(PAF)的結合,這種抑制不依賴于cAMP形成可能是Forskolin直接作用于PAF或者通過干擾PAF與它的受體結合實現(xiàn)的,似乎對多種膜轉運蛋白也有效果并且可以抑制脂肪細胞...

                  2018-04-10
                • 問題一:陰性對照出現(xiàn)陽性結果可能的原因解決的方法試劑/樣品污染試劑和樣品可能被污染,或者由于孔之間的濺灑交叉污染。使用新鮮試劑,小心操作移液器夾心ELISA-檢測抗體與包被抗體反應確定使用的是正確的包被抗體和檢測抗體,他們之間不會相互反應酶標板洗板不*用洗液充滿板空確保每孔被充分洗滌,洗板前確保所有的剩余抗體溶液被倒凈抗體量過多導致非特異性結合根據(jù)推薦用量使用抗體盡量使用較少的抗體問題二:酶標板整體背景高可能的原因解決的方法結合反應太強或時間過長檢查底物的稀釋,使用建議的稀釋...

                  2018-03-28
                • 問題一:缺乏染色可能的原因檢測方法和相應的措施沒有抗原用原位雜交的方法檢測蛋白表達(有時即使能檢測到mRNA。翻譯也有可能受阻)由于錯誤的儲存方法按照說明書儲存。通常,將抗體按照足夠配制單次實驗工作溶液的體積分裝。儲存在手動除霜冰箱中(-20到-70℃),避免反復凍融無效的一抗或二抗單獨檢查報告系統(tǒng)以評估試劑的有效性。固定不充分嘗試增加固定時間或改用不同的固定劑過度固定減少浸潤或固定后步驟的時間。如果必須使用浸潤法固定(例如病理實驗室中的尸檢組織或切片),可以用抗原修復試劑修...

                  2018-03-26
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