2D/3D/Organoid ATP Viability Assay Kit

描述：

2D/3D/Organoid ATP Viability Assay Kit是專門為類器官活性檢測研發(fā)的ATP檢測試劑盒，其發(fā)光技術(shù)原理是熒光素酶以熒光素、三磷酸腺苷(ATP)和O2為底物，在Mg2+存在時，能將化學能轉(zhuǎn)化為光能。ATP既是熒光素酶催化發(fā)光的必需底物，又是所有生物生命活動的能量來源。在熒光素酶催化的發(fā)光反應中，ATP 在一定的濃度范圍內(nèi)，其濃度與發(fā) 光強度呈線性關(guān)系。

2D/3D/Organoid ATP Viability Assay Kit采用生物發(fā)光(bioluminescent)法，利用 Firefly luciferase(螢火蟲熒光素酶)催化底物—— 熒光素的轉(zhuǎn)化，高效利用ATP的能量，發(fā)射出光子。發(fā)光信號與存在的ATP量呈正比，而ATP與存在于類器官中的細胞數(shù)目直接呈正比。

本試劑盒為多孔板而設計，是進行自動化高通量篩選(HTS) ，類器官增殖和毒性分析的理想選擇。均質(zhì)檢測步驟就是將單一試劑直接加入含有類器官培養(yǎng)基的孔板中，無需去除基質(zhì)膠。均質(zhì)檢測的"加樣-混合-檢測" 的操作方案使得類器官裂解和產(chǎn)生的發(fā)光信號與存在的 ATP 量成正比，而 ATP 量直接與類器官中的細胞數(shù)量成正比。特殊的均質(zhì)檢測方案避免了那些 需要多個步驟的ATP檢測方法可能會引入的誤差。

產(chǎn)品組成：

注意：產(chǎn)品建議現(xiàn)配現(xiàn)用

產(chǎn)品特點：
（1）簡化了類器官活性檢測步驟：均質(zhì)的"加樣-混合-檢測"方案減少了其它同類檢測所需的操作步驟。
（2）類器官用量更少：可準確地檢測到低于常用的比色法和熒光法的檢測低限的細胞數(shù)。減少了每個檢測反應所需的細胞數(shù)。
（3）迅速獲得結(jié)果：加入試劑后10分鐘就能獲得數(shù)據(jù)。
（4）可自行選擇檢測方案：可用于多種類型的多孔板操作。可用發(fā)光檢測儀或CCD成像設備記錄數(shù)據(jù)。
（5）可連續(xù)處理培養(yǎng)板：發(fā)光信號穩(wěn)定，樣品可進行批量處理。

使用方法：

1、類器官的準備：
使用適合進行化學發(fā)光檢測的 96 孔板（ 底和蓋子透明，孔壁不透，推薦貨號：abs7242），每孔接種5ul-10ul類器官基質(zhì)膠混懸物，放培養(yǎng)箱半小時以上，待凝固后加入100ul類器官培養(yǎng)基（如使用 384 孔板，每孔接種2.5μl-4μl類器官基質(zhì)膠混懸物，具體用量視不同類型的 384 孔板而定），并確保檢測時每孔的細胞數(shù)量在 5 萬個以內(nèi)（如使用 384 孔板宜控制在 1 萬個以內(nèi)），同時設置不含類器官的基質(zhì)膠培養(yǎng)液孔作為陰性對照，按照類器官培養(yǎng)的常規(guī)方法培養(yǎng)類器官。如有需要，可加入藥物處理類器官。此外，如有必要，也可以設置類器官的濃度梯度，以便后續(xù)確定試劑盒的使用效果。

2、試劑準備：
1管凍干粉加入1管10ml buffer里，混勻避光待用。
注：溶解后盡快使用，-80℃，避光保存，有效期一個月
（1）溶解 Organoid ATP 發(fā)光法檢測試劑，如有必要可適當分裝該試劑。
（2）按照 96 孔板每孔 100μl (384 孔板每孔 25μl)   的量，取適量 Organoid ATP  發(fā)光法檢測試劑，平衡至室溫。

3、類器官活力檢測：
（1）取出類器官培養(yǎng)板在室溫平衡 10 分鐘(通常不宜超過 30 分鐘)。
（2）將96孔板每孔里的類器官培養(yǎng)基去除，每孔加入 100μl Organoid ATP 發(fā)光法檢測試劑(384 孔板每孔 25μl)。
注：無需去除基質(zhì)膠。
（3）室溫劇烈振蕩（微孔板恒溫振蕩器，推薦貨號：abs72034 ）5min使類器官充分裂解。 
（4）室溫(約 25℃)孵育 10 分鐘，使發(fā)光信號趨于穩(wěn)定。
（5）使用具有檢測化學發(fā)光功能的多功能酶標儀進行化學發(fā)光檢測。請根據(jù)儀器要求設置相應的參數(shù)，每個孔的檢測時間一般為 0.25- 1 秒或更長時間，具體需根據(jù)儀器的檢測靈敏度 進行適當?shù)恼{(diào)整。
（6）根據(jù)化學發(fā)光讀數(shù)直接計算類器官的相對活力，或根據(jù) ATP 標準曲線計算出 ATP 的量從而 計算出類器官的相對活力。
注：檢測效果因類器官的種類不同而有所不同，對于一些 ATP 含量特別高的類器官，在細胞數(shù)量達到 50,000 個后可能會不呈線性相關(guān)，但化學發(fā)光讀數(shù)還是會繼續(xù)升高。

注意事項：

1 、熒光素酶的活性對溫度比較敏感，所以反應前類器官和檢測試劑均需平衡至室溫后再進行 測定。檢測試劑請混勻后使用。
2 、本試劑盒的檢測試劑中含有熒光素酶，反復凍融會導致其逐漸失活。為取得良好的使用 效果，第一次溶解后后可適當分裝保存，但需注意分裝的容器不能有 ATP 污染。
3 、待測藥物的溶劑含量較高時可能會干擾熒光素酶反應，從而影響化學發(fā)光信號。可以通 過設置含有溶劑的類器官培養(yǎng)液對照孔排除溶劑的干擾。
4、檢測時須使用適合于類器官培養(yǎng)的白色或黑色的 96 孔板或 384 孔板。如果使用普通透明的 96 孔板或 384 孔板，相鄰孔之間會產(chǎn)生相互干擾。
5、本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品， 不得存放于普通住宅內(nèi)。
6 、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。