細胞上清外泌體提取試劑盒

描述：

外泌體是由細胞分泌的包含 RNA 和蛋白質的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等體液中大量存在。外泌體被認為具有細胞間信使的功能，在特定細胞之間傳遞它們的效應物或信號分子；然而其構造、效應物組成以及所參與的生物學通路目前尚不明晰。

外泌體的生物學功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒，而傳統超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。本外泌體快速提取試劑盒，組分經過優化處理，適用于細胞培養上清液中的外泌體提取，并搭配純化過濾裝置，可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒，可用于電鏡分析、NTA 粒徑分析、核酸分析、蛋白分析、細胞學實驗和動物實驗等。

產品組分

使用方法：

自備材料：
1、高速離心機（可達到 10000 g 離心力），渦旋振蕩器； 2mL 離心轉子；1.5 mL 離心管；
2、1×PBS 緩沖液（無菌）； 

一、樣品預處理：
 1、取樣：如果是凍存樣品，從冰箱取出后于 25℃水浴中進行解凍，將wan全融化后的樣品置于冰上；如果是新鮮樣品，收集樣品后置于冰上；
 2、樣品初始用量：（單次提取時的樣品量）  

3、離心去細胞碎片：將樣品轉移至離心管中，于 4℃以 3000 g 離心 10 min，去除樣品中的細胞碎片；（注：若沉淀較多，可 3000g/10min離心多次至無明顯沉淀，每次取離心上清液）
 4、上清液轉移：去除細胞碎片的離心上清液轉移到新的 50mL 離心管中； 

二、提取外泌體：
 1、上清液預處理：在去除雜質的離心上清液中加入 Exosome Concentration Solution（ECS 試劑），具體的加入劑量如下：（其他劑量請根據表中的試劑用量等比例換算）  

2、溶液混合：加入 ECS 試劑后將離心管蓋緊，通過渦旋振蕩器混勻1min，再放置于4℃靜置至少2h；（增加靜置時間可提高外泌體得率，但靜置時間不可超過 24h）
3、沉淀外泌體：取出裝有混合液的離心管于 4℃以 10000g離心 60min，棄上清，沉淀中富含外泌體顆粒；（注：盡可能吸凈上清液）
4、外泌體重懸：取 1×PBS 均勻吹打離心沉淀物（具體加入劑量如下表），待其溶解后，將重懸液轉移至新的 1.5 mL 離心管中； 

注：其他劑量請根據表中的試劑用量等比例換算
5、收獲外泌體顆粒：將含有重懸液的 1.5 mL 離心管于 4℃以 12000 g 離心 2 min，保留上清液，該上清液中富含外泌體顆粒。
（注：若沉淀較多，可 12000 g /2min 離心多次至無明顯沉淀，每次取離心上清液） 

三、純化外泌體：
1、純化外泌體：將收獲的外泌體顆粒粗品轉入 Exosome Purification Filter（EPF 柱）上室中，于 4℃以 3000 g 離心 10 min，離心后收集 EPF 柱管底的液體，此液體即為純化后的外泌體顆粒；（注：EPF 柱不可重復使用）
 2、外泌體的保存： 純化后的外泌 體以50-100 μL 進行分裝保存于-80℃低溫冰箱中，以備后繼實驗使用。