SP懸浮細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介: 

該產(chǎn)品是我們研發(fā)團(tuán)隊(duì)在貼壁細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑的基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化研發(fā)成功的專(zhuān)門(mén)用于懸浮細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的試劑。它具有非常好的轉(zhuǎn)染性能，可高效轉(zhuǎn)染多種懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率在懸浮細(xì)胞中可高達(dá)85%以上（巨噬細(xì)胞、EGFP質(zhì)粒）。與目前市場(chǎng)上常見(jiàn)的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑不同，它采用生物可降解材料配制，對(duì)細(xì)胞的毒性很低，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡率不到10%。其使用也非常方便，先將轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒DNA混合，再將轉(zhuǎn)染試劑-DNA復(fù)合物直接加入培養(yǎng)細(xì)胞中，血清不影響其轉(zhuǎn)染效果，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液，操作十分簡(jiǎn)便。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、較好的細(xì)胞轉(zhuǎn)染性能：可高效轉(zhuǎn)染多種懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)85%以上；

2、極低的細(xì)胞毒性：使用可降解生物材料，細(xì)胞毒性低，轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%，大大降低了因細(xì)胞毒性對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為客觀；

3、操作簡(jiǎn)便，可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)液。

應(yīng)用：

適用細(xì)胞系：293F，THP-1、RAW264.7、BMDM、CHO-S、Jurkat， K562、U937，NB4、MSCs等。

操作步驟 （以24 孔板轉(zhuǎn)染為例）:

A、 細(xì)胞接種:

1、 轉(zhuǎn)染前一天或者兩天接種細(xì)胞，接種細(xì)胞量為2-4×105 個(gè)。

2、 確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞比活度為90%以上，且生長(zhǎng)狀態(tài)良好。

3、 如果細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前一天鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)可以不用換液，如果細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)最好換液。

B、 SP/DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備(該步完成后應(yīng)立即進(jìn)行轉(zhuǎn)染):

1、 在1.5 ml無(wú)菌離心管中加入50 ul Trans buffer，再加入適量的DNA，見(jiàn)附表。用移液器輕輕混勻成DNA稀釋液。

2、使用前用移液器吹打混勻轉(zhuǎn)染試劑，立即往DNA稀釋液中加入適量的轉(zhuǎn)染試劑，用移液器輕輕混勻。

3、 將SP/DNA復(fù)合物室溫靜置15分鐘后，立即轉(zhuǎn)染。
注意：離心管最好使用聚丙烯離心管。

C、轉(zhuǎn)染:

1、將擬轉(zhuǎn)染細(xì)胞強(qiáng)烈振蕩20-40秒，確保培養(yǎng)細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液，無(wú)細(xì)胞結(jié)團(tuán)；

2、將步驟B制備的轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中，邊加邊輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板。加完后，立即將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

3、 培養(yǎng)24-96小時(shí)后收獲。

4、 SP在培養(yǎng)基中仍有較高的轉(zhuǎn)染效率，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無(wú)血清或低血清培養(yǎng)基。因收獲蛋白需要，可以使用懸浮細(xì)胞培養(yǎng)專(zhuān)用的無(wú)血清培養(yǎng)基。

附表：不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件

保存方法：

2-8℃避光保存，Trans buffer可保存于2-8℃有效期一年，使用前請(qǐng)先將本品輕輕混勻。

注意事項(xiàng)：

、1、對(duì)于24孔板，轉(zhuǎn)染前接種細(xì)胞量以（2-4）x105細(xì)胞為宜，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)應(yīng)保持良好，不要有支原體污染。

2、剛開(kāi)始轉(zhuǎn)染，建議進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，如24孔板，可將細(xì)胞接種3個(gè)孔，每孔接種細(xì)胞數(shù)分別為2x105 、 3x105 、4x105，次日質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染24小時(shí)后觀察轉(zhuǎn)染效果，選擇轉(zhuǎn)染陽(yáng)性率較高的細(xì)胞接種數(shù)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
3、應(yīng)避免轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備體系中存在血清，因血清會(huì)干擾 SP 與DNA形成復(fù)合物，轉(zhuǎn)染所用培養(yǎng)基中盡量不要使用抗生素。
4、為了提高轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)板可放于微型振蕩器上培養(yǎng)或每隔1小時(shí)人工振蕩1次（非常重要）。
5、懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染難度大，且受細(xì)胞種類(lèi)、細(xì)胞密度、細(xì)胞生長(zhǎng)情況、培養(yǎng)方法、操作手法等因素的影響，研究者在轉(zhuǎn)染之前，應(yīng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)，認(rèn)真準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染方案。
6、本試劑主要用于質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染，如需質(zhì)粒DNA、RNA、siRNA均可轉(zhuǎn)染的試劑，請(qǐng)選擇SP懸浮細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑（abs60325）。