SDS裂解液

溶液

1、培養的細胞樣品：
（1）充分融解 SDS 裂解液，之后混勻。取適當量的裂解液，使用前數分鐘內加入 PMSF（100mM），使其最終濃度為 1mM。
（2）貼壁細胞：吸除培養液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍（如果血清中的蛋白沒有干擾，可忽略此步）。按照六孔板的每孔細胞加入 150-250ul 裂解液的比例加量。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-3 秒后，細胞就會被裂解。如果提取的蛋白樣品用于 ChIP，應置于冰上或 4℃裂解 15-30min。
（3）懸浮細胞：離心收集細胞，用手指彈散細胞。按照六孔板的每孔細胞加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細胞/管，然后再裂解。如果提取的蛋白樣品用于 ChIP，應置于冰上或 4℃裂解 15-30min。
（4）充分裂解后，10,000-14,000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進行后續的 PAGE、WB 和 ChIP 等操作。
【裂解液用量說明】：通常 6 孔板每孔細胞加入 150μl 裂解液已經足夠，如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到 200uμl 或 250ul。如果用于 ChIP，建議 6 孔板每孔細胞至少加入 200ul 裂解液。
2、組織樣品：
（1）將組織切成細小的碎片。
（2）充分融解 SDS 裂解液，之后混勻。取適當量的裂解液，使用前數分鐘內加入 PMSF（100mM），使其最終濃度為 1mM。
（3）按照每 20mg 組織加入 150-250ul 裂解液的比例加量。
【注意：如果裂解不充分可以適當添加用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可適當降低用量。】
（4）用玻璃勻漿器勻漿直至充分裂解，此過程盡量控制在 1-2 分鐘內，以減少蛋白的降解。如果提取的蛋白樣品用于 ChIP，應置于冰上或 4℃繼續裂解 10-20min。
（5）充分裂解后，10,000-14,000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進行后續的 PAGE、WB 和 ChIP 等實驗。
（6）如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過高強度的漩渦混勻器使樣品裂解充分，之后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解的足夠充分。

1、為取得最佳的使用效果，盡量避免過多的反復凍融。可以適當分裝后使用。
2、裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。
3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

-20℃，有效期12個月。