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| 品牌 | absin | 貨號 | abs9160 |
|---|---|---|---|
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 生物產業 |
| 產品描述 | |
| NP-40裂解液描述 | NP-40，也稱 Nonidet P-40（乙基苯基聚乙二醇），是一種常見的非離子型去垢劑。 NP-40 裂解液（NP-40 Lysis Buffer）是一種比較溫和的細胞組織裂解液，主要成分為 50mM Tris-HCl （pH 7.4），150mM NaCl，1% NP-40 以及焦磷酸鈉，正釩酸鈉，氟化鈉，EDTA 和抑肽酶等多種抑制劑，可廣譜且有效抑制蛋白降解，經本品裂解所得的蛋白樣品，適用于常規的蛋白免疫印跡（Western Blot），免疫沉淀（IP）和免疫共沉淀（Co-IP）等實驗。經本品裂解收集的蛋白樣品，可使用增強型 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定總蛋白濃度。由于本品含有較高濃度的去垢劑，不適合用 Bradford 法來測定總蛋白濃度。 |
| 使用方法 | A培養的細胞樣品 （1）充分融解 NP-40 裂解液，之后混勻。取適當量的裂解液，使用前數分鐘內加入 PMSF（Mw：174.2 g/mol），使其最終濃度為 1mM。 （2）貼壁細胞：吸除培養液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍（如果血清中的蛋白沒有干擾，可忽略此步）。按照六孔板的每孔細胞加入 150-250ul 裂解液的比例加量。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。裂解 15-30 分鐘，通常裂解液接觸細胞 1-3 秒后，細胞就會被裂解。 懸浮細胞：離心收集細胞，用手指彈散細胞。按照六孔板的每孔細胞加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細胞/管，然后再裂解。 （3）充分裂解后，10,000-14,000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進行后續的 PAGE、WB 和免疫沉淀等實驗。 【裂解液用量說明】：通常 6 孔板每孔細胞加入 150ul 裂解液已經足夠，如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到 200ul 或 250ul。 NP-40裂解液 B組織樣品 （1）將剪切成細小的碎片。 （2）充分融解 NP-40 裂解液，之后混勻。取適當量的裂解液，使用前數分鐘內加入 PMSF（Mw：174.2 g/mol），使其最終濃度為 1mM。 （3）按照每 20mg 組織加入 150-250ul 裂解液的比例加量。【注意：如果裂解不充分可以適當添加用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可適當降低用量。】 （4）用玻璃勻漿器勻漿直至充分裂解，此過程盡量控制在 1-2 分鐘內，以減少蛋白的降解。 （5）充分裂解后，10,000-14,000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進行后續的 PAGE、WB 和免疫沉淀等實驗。 （6）如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過高強度的漩渦混勻器使樣品裂解充分，之后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解的足夠充分. |
| 注意事項 | 1、裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。 2、不同的細胞需要加入的裂解液的量可能會不同，需要根據具體條件進行條件篩選； 3、為了您的自身安全，使用試劑前，請做好防護，如穿實驗服，帶手套等。 |
| 基本信息 | |
| 儲存/保存方法 | -20℃凍存 |
| 溫馨提示：本產品僅作科研實驗使用，不支持臨床等研究 |
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