PI細胞周期與凋亡試劑盒

本產(chǎn)品用于培養(yǎng)的貼壁細胞或者懸浮細胞檢測，也可用于組織細胞檢測。

自備耗材和設備：
1 ml 移液器
100-200 μl 移液器
旋窩混勻儀
流式細胞儀
PBS
75%乙醇

適用實驗與操作過程：
1、細胞準備 貼壁細胞：棄細胞培養(yǎng)液，胰酶消化，制備單細胞懸液， 1000 g離心5分鐘，棄上清。沉淀用1 ml預冷的PBS重懸。再次 1000 g離心5分鐘，棄上清。 懸浮細胞：收集細胞懸液，1000 g離心5分鐘，棄上清。沉淀 用1 ml預冷的PBS重懸。再次1000 g離心5分鐘，棄上清。 組織細胞：將組織塊用剪刀剪成盡量小的小塊后，用0.25%的 胰酶消化0.5-1個小時。經(jīng)過200-400目篩網(wǎng)過濾得到單細胞懸液。 1000 g離心5分鐘，棄上清，沉淀用1 ml預冷的PBS重懸。再次 1000 g離心5分鐘，棄上清。 注意，最后一次離心，棄上清后留50 μl上清，渦旋混勻。
2、細胞固定 細胞沉淀用1 ml -20 ℃預冷的75%乙醇輕輕混勻，4℃固定2小 時以上或者過夜。然后，1000 g離心5分鐘，輕輕棄上清，沉淀用1 ml預冷的PBS重懸，1000 g離心5分鐘，棄上清。
3、染色 PI染色工作液配置： 0.5 ml染色緩沖液（C液）中加入25μl PI 染液（A液）和10 μl RNase A（B液），混勻待用。每個細胞樣品 加入0.5 ml配置好的PI染色工作液，輕輕混勻重懸細胞。37℃，避 光孵育30分鐘，直接上流式細胞儀檢測（5小時內(nèi)完成為佳）。激 發(fā)波長為488 nm，檢測紅色熒光。 注意：每個檢測細胞數(shù)不超過1×106個。

1、PI具有毒性，操作時應注意防護，保護眼睛、避免吸入、并戴一次性手套。
2、PI存在淬滅現(xiàn)象，保存和使用過程中注意避光。

-20 ℃避光保存，有效期12個月。