Trizol

Trizol是細胞或組織總RNA抽提試劑。本產(chǎn)品采用和Invitrogen公司的TRIzol完quan相似的原理和方法，抽提的方法和步驟wan全相同。
Trizol的顏色和TRIzol相同，加入氯仿后上層呈無色，下層呈紅色，便于吸取上層水相。
Trizol對動植物細胞或組織及細菌的總RNA抽提均適用。
Trizol抽提所得RNA無DNA和蛋白污染。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值為1.8-2.0。
裂解細胞或和組織共勻漿時，Trizol可以保持樣品中RNA的完整性，即可以有效抑制RNA的降解。
每一百萬細胞用Trizol抽提可得5-15μg RNA；每毫克組織用Trizol抽提可得1-10μg RNA。產(chǎn)量因細胞和組織不同而異。
Trizol抽提所得RNA可直接用于Northern，點雜交，純化mRNA，體外翻譯，RNase protectionassay，cDNA克隆，以及RTPCR；也可以用于基因表達芯片分析、高通量測序等對RNA質量要求較高的情況。

1、細胞裂解：
   組織樣本： Trizol用量：每 50-100 mg 組織加 1 ml Trizol，樣品體積不應超過 Trizol 體積的 10％。
（1）將動物或植物組織切成小塊，在液氮中磨碎或用勻漿器勻漿處理。
（2）將研磨好的組織粉末快速轉入裝有 1 ml Trizol 的 2 ml 離心管中，在渦旋振蕩器上迅速振蕩混勻，置于冰上， 待所有的樣品研磨完。
（3）裂解產(chǎn)物應呈澄清的透明粘稠液體。對于富含蛋白、脂肪或多糖物質的組織樣品如肌肉、脂肪組織和植物結節(jié)部位等，勻漿后仍會存留有不溶物質，可于 4℃ 12,000 x g 離心 10 min，然后吸取上清至一新的離心管中。
  細胞樣本：
（1）貼壁細胞：吸盡培養(yǎng)液，每10cm2培養(yǎng)面積（6孔板單孔或35mm平皿）加入1ml Trizol，用加樣器吹打數(shù)次，以確保細胞完quan裂解，然后轉移至離心管中。 注：Trizol的使用量應由培養(yǎng)皿表面 積決定，而非由細胞數(shù)目決定。Trizol量不足可能導致提取的RNA中有DNA污染 。
（2）懸浮細胞：離心收集細胞，吸盡液體，每 5-10×106動植物或酵母細胞，或每 1×107細菌細胞加入 1ml Trizol， 用加樣器吹打，使其完quan裂解，然后轉移至離心管中。 注：添加 Trizol 前切勿洗滌細胞 ，以免 RNA 降解。必要時可以用勻漿器來裂解某些細菌或者酵母細胞 。
2、液相分離：
（1）裂解產(chǎn)物于室溫放置5min，使核酸-蛋白復合物完quan分離。（注：此時樣品可在-80℃長期保存。 ）
（2）每1ml Trizol 加入0.2ml 氯仿，蓋緊管蓋，劇烈振蕩15s，室溫放置2-3min。
（3）4℃ 12,000 x g 離心15min，樣品會分成三層：桔黃色的下層有機相，中間層和無色的上層水相。
（4）吸取含總 RNA 的上層水相至一新的離心管中，吸取水相的體積為所用 Trizol 試劑的 60％。
3、RNA 回收
（1）按照每 1 ml Trizol 的最初使用量加入 0.5 ml 異丙醇，顛倒數(shù)次混勻，室溫放置 10 min。
（2） 4℃ 12,000 x g 離心 10 min，棄除上清，可見膠狀的 RNA 沉淀。
（3）按照每 1 ml Trizol 的最初使用量加入 1 ml 75%乙醇，顛倒數(shù)次混勻，洗滌沉淀。
（4）4℃ 12,000 x g 離心 5 min，棄除上清。
（5）室溫倒置 5-10 min 晾干或真空抽干（不要使用真空干燥離心機，以免 RNA 過干，難以溶解）。
（6）加入適量（如 25ul） DEPC-ddH2O 或 TE 緩沖液，用加樣器吹打數(shù)次溶解 RNA。
（7）通過 RNA 電泳以及紫外分光光度計檢測，確定 RNA 的濃度、純度和完整性。
（8）所得的 RNA 應立即使用或適量分裝后-80℃保存，避免反復凍融。

4℃避光密閉保存，保質期12個月。

1、如果需要測量 RNA 的 A260/A280 的比值，建議使用 RNA 定量緩沖液對樣品稀釋后，進行測量。
2、所有離心管，槍頭及相關溶液都必須無 RNA 酶污染。耐高溫器物可 180℃烘烤 4 小時以去除RNA 酶，其它器物去除 RNA 酶可考慮用 0.01%的 DEPC 水浸泡過夜，然后滅菌，烘干。溶液需用 DEPC 水配制。加 0.01% DEPC 至重蒸水或 MiliQ 級水中，處理過夜，滅菌即成 DEPC 水。
3、使用凍存的細胞或組織抽提總 RNA 的效果通常比新鮮的細胞或組織差一些。因為在細胞或組織凍融過程中一些細胞或組織內(nèi)的 RNase 會被釋放出來并剪切樣品。如果不能及時抽 RNA， 推薦先加入適量 Trizol，并裂解樣品后凍存。
4、必須戴一次性手套操作，且盡量不要對著 RNA 樣品呼氣或說話，以防 RNA 酶污染。建議戴一次性口罩操作。
5、避免接觸皮膚或吸入。為防止濺入眼睛，請戴防護眼鏡或使用透明保護屏。如皮膚接觸 Trizol，請立即用大量去垢劑和水沖洗，如仍有不適，請聽取醫(yī)生意見。
6、為了您的自身安全，使用試劑前，請做好防護，如穿實驗服，帶手套等。

總RNA提取試劑（Trizol試劑）