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一、背景介紹
◆ 蛋白A是???葡萄球菌的細胞壁中的表?蛋?，它由折疊成三螺旋束的五個同源Ig結合域組成；
◆ 蛋白G是G、C型鏈球菌細胞壁中的?種蛋?質；
◆ 蛋白A/G是重組蛋?A蛋?G融合蛋?，融合了來?蛋?A的5個Fc結合域和蛋?G的3個Fc結合域；
◆ 蛋白L來源于?消化鏈球菌，并通過L鏈相互作?與免疫球蛋?結合。
圖1 抗體與抗體親和配基的作用區域
表1 蛋白A、G、L的抗體親和性差異分析
| 蛋白A | 蛋白G | 蛋白A/G | 蛋白L |
優點 | 結合位點在CH2和CH3結構域之間的Fc區域，以及? VH3家族的Fab區內的重鏈
| 可以特異性地同免疫球蛋?IgG分?的Fc段結合?不影響其Fab段與抗原分?結合的能? | 可以與?的所有IgG亞型、IgA、IgE、IgM結合。蛋?A/G降低了對pH的依賴，允許在pH 5-8進?結合 | 只與抗體的κ輕鏈結合?不會影響抗體的抗原結合位點。可以結合更?泛的抗體類別，如?類的IgG、IgM、IgA、IgE、IgD，以及含κ輕鏈(?類1,3,4型，??1型)的Fab、scFv等抗體?段 |
缺點 |
|
| 不能與??的IgA、IgM和?清?蛋?結合 | 不結合?、??或綿?來源的免疫球蛋? |
應用 | 免疫球蛋?的純化、固定或檢測領域 | 從?清中分離并純化或去除IgG、單克隆抗體的純化和抗原抗體復合物的分離等 | ?IgG單抗的提取和檢測 | 從添加BSA或FCS的培養液中純化單克隆抗體，也?泛?于基因改造?程化抗體的純化分離 |
表2 抗體親和配基與不同來源及亞型抗體之間的親和?
種類 | 亞型 | 蛋白A | 蛋白G | 蛋白A/G | 蛋白L |
人 | IgG1 | +++ | +++ | +++ | +++ |
IgG2 | +++ | +++ | +++ | +++ | |
IgG3 | + | +++ | +++ | +++ | |
IgG4 | +++ | +++ | +++ | +++ | |
IgM | + | - | + | +++ | |
IgD | - | - | - | +++ | |
IgA | + | - | + | +++ | |
Fab | + | + | + | +++ | |
小鼠 | IgG1 | + | ++ | ++ | +++ |
IgG2a | +++ | +++ | +++ | +++ | |
IgG2b | +++ | +++ | +++ | +++ | |
IgG3 | +++ | +++ | +++ | +++ | |
IgM | - | - | - | +++ | |
大鼠 | IgG1 | + | ++ | ++ | +++ |
IgG2a | - | +++ | +++ | +++ | |
IgG2b | - | + | + | +++ | |
IgG2c | +++ | +++ | +++ | +++ | |
牛 | IgG1 | + | +++ | +++ | - |
IgG2 | +++ | +++ | +++ | - | |
山羊 | IgG1 | + | +++ | +++ | - |
IgG2 | +++ | +++ | +++ | - | |
馬 | IgG(ab) | + | - | + | NA |
IgG(c) | + | - | + | NA | |
IgG(T) | - | +++ | +++ | NA | |
兔 | IgG | +++ | +++ | +++ | + |
豬 | IgG | +++ | + | +++ | +++ |
狗 | IgG | +++ | + | +++ | NA |
雞 | IgY | - | - | - | - |
注：- 表示不包含；+ 表示中標組合；+++ 表示錯誤組合；NA 表示不適用或數據不可用。
二、抗體親和純化填料參數
類別 | 重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF | 重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF | 重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF | 蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF | 重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF |
基質 | 4%交聯瓊脂糖 | 4%交聯瓊脂糖 | 4%交聯瓊脂糖 | 4%交聯瓊脂糖 | 4%交聯瓊脂糖 |
配基 | 重組金黃色葡萄球菌蛋白A，≥6mg/mL | 重組鏈球菌蛋白G，≥6mg/mL，單點偶聯 | 重組耐堿蛋白A，≥6mg/mL | 蛋白A蛋白G融合蛋白，≥6mg/mL | 重組大消化鏈球菌蛋白L，≥6 mg/mL |
粒徑范圍a | 45-165μm | ||||
平均粒徑 | ~90μm | ||||
動態結合載量b | ≥40mg h-IgG/mL | ≥40mg h-IgG/mL | ≥45mg h-IgG/mL | ≥40mg h-IgG/mL | ≥40mg k輕鏈h-IgG/mL |
推薦工作流速c | 60-300cm/h | 60-300cm/h | 60-300cm/h | 60-150cm/h | 60-300cm/h |
最大流速與壓力d | ＞900cm/h | ||||
使用 pH | 3-10(推薦的工作pH),3-12(短期穩定) | 3-9(推薦的工作pH),2-10(短期穩定) | 3-10(推薦的工作pH),3-12(短期穩定) | 3-10(推薦的工作pH),3-12(短期穩定) | 2-9(推薦的工作pH),15mM NaOH(CIP) |
化學穩定性 | 在以下溶液中穩定：常用的水相緩沖液、10-100mmol/L NaOH、6mol/L鹽酸胍、70%乙醇。 | 在以下溶液中穩定：常用的水相緩沖液、6mol/L鹽酸胍、70%乙醇。 | 在以下溶液中穩定：常用的水相緩沖液、0.1-0.5mol/L氫氧化鈉、6 mol/L鹽酸胍、70%乙醇等。 | 在以下溶液中穩定：常用的水相緩沖液、0.1-0.5mol/L氫氧化鈉、6mol/L 鹽酸胍、70%乙醇等。 | 在以下溶液中穩定：常用的水相緩沖液、6mol/L鹽酸胍、70% 乙醇。 |
注：
a：90%體積以上的微球在此粒徑范圍；
b：DBC10%測試條件為：10%流穿，6min停留時間；
c：推薦流速是指該流速可滿足大部分柱高下2-6min停留時間的使用條件，并非只能在該流速范圍內工作；
d：10cm柱高下的最大測試流速。
三、應用數據
圖2 工藝溶劑穩定性
圖3 不同蛋?A填料對NaOH的耐受性
圖4 不同蛋?G填料的洗脫曲線，樣品為h-IgG
圖5 填料：重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱)(Cat: abs91003-M)；
樣品：牛血清，相對于填料約20mg IgG/mL填料；
上樣、結合緩沖液： 20mM PB, 150mM NaCl, pH7.4, 10CV；
洗脫緩沖液：100mM甘氨酸，pH3.0，14CV；
在位清洗(CIP)：100mM NaOH，10CV
四、愛必信抗體親和純化填料產品信息
貨號 | 產品名稱 | 規格 |
abs91001-F | 重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF | 10mL/100mL |
abs91001-G | 重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF(重力預裝柱) | 1mL/5mL |
abs91001-M | 重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱) | 1mL/5mL |
abs91002-F | 重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF | 10mL/100mL |
abs91002-G | 重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF(重力預裝柱) | 1mL/5mL |
abs91002-M | 重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱) | 1mL/5mL |
abs91003-F | 重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF | 10mL/100mL |
abs91003-M | 重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱) | 1mL/5mL |
abs91003-G | 重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF(重力預裝柱) | 1mL/5mL |
abs91004-F | 蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF | 10mL/100mL |
abs91004-M | 蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱) | 1mL/5mL |
abs91004-G | 蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF(重力預裝柱) | 1mL/5mL |
abs91005-F | 易洗脫蛋白G瓊脂糖凝膠FF | 10mL/100mL |
abs91005-M | 易洗脫蛋白G瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱) | 1mL/5mL |
abs91005-G | 易洗脫蛋白G瓊脂糖凝膠FF(重力預裝柱) | 1mL/5mL |
abs91006-F | 重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF | 10mL/100mL |
abs91006-M | 重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱) | 1mL/5mL |
abs91006-G | 重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF(重力預裝柱) | 1mL/5mL |
參考文獻
[1] Arora S, Saxena V, Ayyar BV. Affinity chromatography: A versatile technique for antibody purification. Methods. 2017 Mar 1;116:84-94. doi: 10.1016/j.ymeth.2016.12.010. Epub 2016 Dec 22. PMID: 28012937.
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