THP-1分化成巨噬細胞誘導攻略

概述

巨噬細胞是免疫系統(tǒng)中的重要組成部分，在保護機體免受感染和維持組織平衡方面發(fā)揮著關鍵作用。為了研究巨噬細胞的功能和機制，科學家們創(chuàng)造了一種不需要從患者或動物采集組織的模型，即THP-1細胞。THP-1細胞系最初來自一位急性單核細胞白血病患者的血液，屬于懸浮細胞，有分化為多種巨噬細胞的能力，成為巨噬細胞分化的好選擇。THP-1細胞可通過化學物質(zhì)處理、細胞因子刺激或共培養(yǎng)等方法，誘導其分化為具有巨噬細胞特性的細胞群。

機理

細胞因子刺激是一種常見的THP-1細胞誘導分化方法。IL-4和IL-13等細胞因子能夠促使THP-1細胞分化為巨噬細胞，并啟動特定的信號通路，進而調(diào)控細胞功能。這種方法可以模擬體內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)過程，并提供一種便捷的方式來研究巨噬細胞在炎癥反應、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤等方面的功能。

巨噬細胞被分為兩種主要類型：M1型巨噬細胞和M2型巨噬細胞。THP-1細胞通常用佛波酯(PMA)(abs9107)誘導分化為巨噬細胞，然后在PMA仍然存在的情況下：

加入脂多糖(LPS)(誘導濃度：100ng/mL)(abs47014848)、IFN-γ(誘導濃度：20ng/mL)(abs04123)培養(yǎng)48h，誘導其向M1極化；

加入IL-4(誘導濃度：20ng/mL)(abs04698)、IL-13(誘導濃度：20ng/mL)(abs04079)培養(yǎng)48h，誘導其向M2極化；

最后，在無刺激物和無PMA的情況下，用無血清RPMI-1640基礎培養(yǎng)基重懸細胞，可保持72h。

誘導步驟

THP-1誘導分化成巨噬細胞實驗步驟：

（1）THP-1細胞的培養(yǎng)：更多培養(yǎng)技巧可查看THP-1細胞培養(yǎng)攻略

THP-1（人單核細胞白血病細胞）細胞基本信息

THP-1（人單核細胞白血病細胞）

（2）誘導培養(yǎng)基的配置：向1640wan全培養(yǎng)基（含胎牛血清）里加入PMA（誘導濃度：100ng/mL）制成誘導培養(yǎng)基；

（3）接種細胞：收集THP-1細胞并進行計數(shù)，用誘導培養(yǎng)基重懸細胞沉淀調(diào)整細胞密度為5*10^5/mL，將細胞種入六孔板，每孔加入細胞懸液2mL；

（4）誘導培養(yǎng)：48h后，顯微鏡下觀察巨噬細胞構(gòu)建成功；

（5）誘導成功的標志：單核細胞THP-1用PMA誘導后，由懸浮式生長變成貼壁生長，由圓形變成不規(guī)則形態(tài)，體積進一步增大，細胞漿疏松，細胞核增大明顯，可見大量明顯細胞器，胞膜周圍可見少量突起。

PMA誘導THP-1細胞培養(yǎng)的相差顯微照片

用PMA孵育THP-1細胞48h，顯示THP-1(40X)在(A)誘導前(B)誘導后的形態(tài)學變化。它們的形態(tài)由圓形變?yōu)榧氶L和扁平。

巨噬細胞進一步誘導成M1型實驗步驟：

（1）誘導培養(yǎng)基的配置：向1640wan全培養(yǎng)基（含胎牛血清）里加入PMA（誘導濃度：100ng/mL）、脂多糖(LPS)(誘導濃度：100ng/mL)(abs47014848)、IFN-γ(誘導濃度：20ng/mL)（abs04123），制成誘導培養(yǎng)基；

（2）誘導培養(yǎng)：將已經(jīng)誘導成的巨噬細胞上清棄除，加入誘導培養(yǎng)基（6孔板，每孔2mL）培養(yǎng)48h，誘導其向M1極化。48h后，顯微鏡下觀察M1細胞是否構(gòu)建成功；

（3）最后，在無刺激物和無PMA的情況下，用無血清RPMI-1640基礎培養(yǎng)基重懸細胞，可保持72h。

巨噬細胞進一步誘導成M2型實驗步驟：

（1）誘導培養(yǎng)基的配置：向1640wan全培養(yǎng)基（含胎牛血清）里加入PMA（誘導濃度：100ng/mL）、加入IL-4(誘導濃度：20ng/mL)（abs04698）、IL-13(誘導濃度：20ng/mL)（abs04079）制成誘導培養(yǎng)基；

（2）誘導培養(yǎng)：將已經(jīng)誘導成的巨噬細胞上清棄除，加入誘導培養(yǎng)基（6孔板，每孔2mL）培養(yǎng)48h，誘導其向M2極化。48h后，顯微鏡下觀察M2細胞是否構(gòu)建成功；

（3）最后，在無刺激物和無PMA的情況下，用無血清RPMI-1640基礎培養(yǎng)基重懸細胞，可保持72h。

THP-1極化進入M1和M2巨噬細胞圖

M1型形態(tài)多樣，偽足較多，分叉明顯，M2型形態(tài)均一，多呈長條型，分叉不明顯。

M1和M2型鑒定

上述形態(tài)是初步的鑒別方法，更準確的可以通過流式細胞術一般是通過一些巨噬細胞標志物進行的，常見的M1巨噬細胞標志物有CD68、CD80、CD86、CD32等；常見M2巨噬細胞標志物有CD206、CD204、CD163等。

M1和M2型常見鑒定marker

今天講解就到這了，大家如有細胞培養(yǎng)問題，歡迎交流哦！

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