HaCaT細(xì)胞培養(yǎng)攻略

HaCaT細(xì)胞是人類(lèi)永生化表皮細(xì)胞，由角質(zhì)形成細(xì)胞培育而來(lái)的，保留了角質(zhì)形成細(xì)胞分化能力，是非腫瘤來(lái)源的人正常皮膚永生化角質(zhì)形成細(xì)胞株，與正常人角質(zhì)形成細(xì)胞分化特性相似，可以繁殖150代以上，但不是腫瘤細(xì)胞，不具有腫瘤特性。

該細(xì)胞較難消化，胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) ，含酚紅(abs47014938)消化5min作用，有時(shí)可能高達(dá)10min，主要由于細(xì)胞不同分化程度和融合度而異。注意消化前一定要用PBS清洗細(xì)胞2-3次，鋪板時(shí)一定要均勻，因?yàn)镠aCat成片生長(zhǎng)，鋪板不勻會(huì)存在局部生長(zhǎng)過(guò)密難以消化，生長(zhǎng)稀疏部分容易消化過(guò)度的情況。

圖a 低Ca²⁺條件下HaCat細(xì)胞基礎(chǔ)狀態(tài)和圖b高Ca²⁺條件下HaCat細(xì)胞分化狀態(tài)

10%FBS培養(yǎng)體系中的Ca²⁺足以誘導(dǎo)該細(xì)胞分化，也就是說(shuō)，正常培養(yǎng)體系下，該細(xì)胞會(huì)逐漸分化，分化前細(xì)胞近紡錘形，排列較松散，分化后細(xì)胞向立方體發(fā)展，排列緊密，呈片狀生長(zhǎng)。

低鈣離子條件下，HaCat增殖更快，K14的表達(dá)僅限于表皮基底層，而K10和總合蛋白的存在表明表型分化程度更高。通過(guò)免疫熒光實(shí)驗(yàn)證實(shí)了HaCat細(xì)胞分化表型的獲得，與第6天相比，分化標(biāo)記K10在HaCaT細(xì)胞中的表達(dá)在第14天顯著增加，幾乎100%的細(xì)胞是陽(yáng)性的，這可能和細(xì)胞密度有關(guān)。

牛腦垂體物常用作無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)的生長(zhǎng)補(bǔ)充劑，可促進(jìn)上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和黑色素細(xì)胞增殖，廣泛用作各種上皮細(xì)胞和黑色素細(xì)胞培養(yǎng)中的補(bǔ)充劑。此外，其具有抗氧化能力，可對(duì)抗過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的細(xì)胞壞死，蛋白質(zhì)氧化，膜破碎和DNA損傷。

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[1] Wilson VG. Growth and differentiation of HaCaT keratinocytes. Methods Mol Biol. 2014;1195:33-41. doi: 10.1007/7651_2013_42. PMID: 24155234.
[2] Colombo I, Sangiovanni E, Maggio R, et al. HaCaT Cells as a Reliable In Vitro Differentiation Model to Dissect the Inflammatory/Repair Response of Human Keratinocytes. Mediators Inflamm. 2017;2017:7435621. doi:10.1155/2017/7435621

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