細胞養得好，血清有門道

血清是細胞培養的必要成分之一，胎牛/新生牛/小牛/成牛種類繁多，加上市場上各種品牌，讓細胞小白挑花了眼，小愛圍繞以下問題帶您一站式了解。

? 血清為何對細胞狀態影響如此之大？
? 血清到底如何挑選？
? 絮狀物、沉淀、過濾、滅活等使用常見問題？
? 細胞出現問題如何判斷是否與血清有關？

一、血清為何對細胞狀態影響如此之大？

血清中含有多種已知和未知的成分，主要包括：蛋白質和多態、多種因子、氨基酸、激素、其他微量元素及不確定成分。其中生長因子促進細胞增值，附著因子促進細胞貼壁并具有抗胰酶活性，各種蛋白質可提供細胞生長所必需的營養物質，礦物質、脂類及激素也可以結合于血清的蛋白質中，由此可見血清在細胞培養過程中十分關鍵，其本身存在多種未知成分，采血時間差異，批次之間差異等，綜合決定了血清對細胞狀態的影響程度。

根據動物來源不同，血清可分為馬血清、牛血清、豬血清，還有羊、雞、兔等動物來源的血清，根據采血時間、血緣品質又分為不同類別，加之不同工藝的加工，市面上可見的血清種類繁多。

愛必信血清

通常馬血清用于神經細胞的培養，豬血清用于疫苗生產，新生牛作為乳制品產業中的副產品，其血清產量更高、效益更好，適用細胞范圍也更廣。

為什么胎牛血清比新生牛血清貴？隨著胎齡的增長，補體系統逐漸發育，各種生長因子逐漸減少，進食后的小牛血清中IgG含量增多，使血清隨著采血時間后移質量相對下降，而且每頭胎牛僅能獲得約500ml血清，種種因素使得胎牛血清成為細胞培養的血清，價格也相對更加昂貴。為了滿足不同實驗需求，產生了適合外泌體研究的去外泌體血清，適合脈沖示蹤實驗的透析胎牛血清等等，而不同的生產工藝產生了特級、優級、標準級血清。

牛血清根據采血時間不同分類表

判斷血清質量的四個指標：依據《中國生物制品主要原輔料質控標準2000年版》

? 有害微生物，不能含有牛腹瀉病毒，不能被噬菌體、支原體、真菌污染；
? 內毒素，不應高于10 EU/ml；
? 總蛋白含量，3.5%~5%（w/V），過高可能是由于采血時間較晚，過低血清可能被人為稀釋；
? 血紅蛋白，從一定程度上反映了采集流程的規范程度。不應高于0.02% (w/V)。

此外還流傳著通過顏色判斷血清質量的方法，小愛認為不夠科學，血清顏色由是血紅蛋白（紅）和膽紅素（黃）決定，胎牛尚未發育好，因此其凝血功能不完善，所以采集血清時溶血不可避免，根據血紅蛋白是否超標來判斷采血過程的規范性更為精準。

二、絮狀物、沉淀、過濾、滅活等使用常見問題？

我們推薦大家養成先4℃解凍，室溫或37℃融解的方法，由于蛋白質等干物質的融解速度大于水這類溶劑，所以我們在血清融解過程中最好多次混勻，避免大量蛋白融于極少部分水，而產生蛋白沉淀。

如果融解血清時出現沉淀也不要著急，產生的沉淀多為脂蛋白和纖維蛋白，血清中這些物質的含量遠遠高于細胞生長需求，所以并不影響后續細胞培養效果，血清打開后分裝使用，避免反復凍融可以降低出現沉淀的概率，遇到血清沉淀的情況我們可以嘗試延長融解時間或者離心去除沉淀。

血清融解產生的沉淀（圖片來源于網絡，僅供學習使用）

此外血清在生產時經過多次過濾除菌，有些血清還經過輻照滅菌，所以在一般無需過濾。熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質，但是在胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要，補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出，其他的補體成分也很少。

三、細胞出現問題如何判斷是否與血清有關？

主要看是否更換了新批次的血清，不同批次的血清成分可能有一定程度的改變，所以推薦購買血清時多囤幾瓶同批次的，更換批次后，一定要注意觀察細胞狀態。

四、血清批間差會造成細胞哪些改變呢？

主要表現為增長變慢，細胞邊界不清，形態改變，空泡化，貼壁能力減弱，漂浮，凋亡增多等。

血清批間差造成的細胞聚團、形態改變、空泡化

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