細胞漿、細胞核及細胞膜蛋白抽提試劑盒

細胞漿、細胞核及細胞膜蛋白抽提試劑盒實驗流程：
1、試劑準備
1.1準備溶液
1.1.1室溫融解試劑盒中的各種溶液，溶解后除結(jié)構蛋白提取液外，其他試劑立即置于冰上；
1.1.2 結(jié)構蛋白提取液溶解后，可放置于37℃水浴中溫浴至透明后，常溫放置。
1.2蛋白提取工作液的準備
1.2.1胞漿蛋白提取工作液的準備：臨用前，根據(jù)處理樣品的量估算實驗時胞漿蛋白提取液的需要量，并分別按照1:50比例加入磷酸酶抑制劑II和1:100比例加入蛋白酶抑制劑PMSF。
1.2.2胞核蛋白提取工作液的準備：臨用前，根據(jù)處理樣品的量估算實驗時胞核蛋白提取液的需要量，并分別按照1:50比例加入磷酸酶抑制劑II和1:100比例加入蛋白酶抑制劑PMSF。
1.2.3膜蛋白提取工作液的準備：臨用前，根據(jù)處理樣品的量估算實驗時膜蛋白提取液的需要量，并分別按照1:50比例加入磷酸酶抑制劑II和1:100比例加入蛋白酶抑制劑PMSF。
1.2.4 結(jié)構蛋白提取工作液的制備：臨用前，根據(jù)處理樣品的量估算實驗時結(jié)構蛋白提取液的需要量，并分別按照1:50比例加入磷酸酶抑制劑II和1:100比例加入蛋白酶抑制劑PMSF。

2、對于培養(yǎng)細胞樣品：
2.1胞漿蛋白提取
2.1.1加2.0ml（2.0×107細胞 ）的胞漿蛋白提取工作液，在4℃條件下震蕩20分鐘；
2.1.2準備1-5ml的注射器，用注射器吹打步驟1震蕩過的溶液50-90次，在4℃條件下，15000g離心10分鐘。取上清液存于EP管中，即為胞漿蛋白；
2.2胞核蛋白的提取取
2.1.2步驟獲得的沉淀物加入4.0ml/20million cells冰浴的胞漿蛋白提取工作液，在4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下15000g離心10分鐘，棄去上清液，沉淀物中加入1.0ml/20million cells冰凍的胞核蛋白提取工作液, 在4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下15000g離心10分鐘，上清液為細胞核蛋白，轉(zhuǎn)入EP管并保存；
2.3胞膜蛋白的提取在步驟2.2中的沉淀物中加入1.0ml/20million cells冰凍的膜蛋白提取工作液, 在4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下15000g離心10分鐘，上清液為細胞膜蛋白，轉(zhuǎn)入EP管并保存。
2.4結(jié)構蛋白的提取在步驟2.3的沉淀物中加入常溫或37℃水浴過的透明的結(jié)構蛋白提取工作液 0.5ml/20million cells, 4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下15000g離心10分鐘，保存上清液即為細胞骨架蛋白；
2.5待測蛋白的保存待檢測濃度的蛋白存于-70℃。

3.對于組織樣品：
3.1胞漿蛋白提取
3.1.1加2.0ml/g的胞漿蛋白提取工作液,在4℃條件下研磨，重復勻漿兩次，至全部溶解；
3.1.2在4℃條件下，震蕩5分鐘，18000g離心10分鐘。取上清液存于EP管中，即為胞漿蛋白，沉淀物繼續(xù)實驗；
3.2胞核蛋白的提取在步驟3.1.2中的沉淀物中加4.0ml/g的胞漿蛋白提取工作液,在4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下18000g離心10分鐘，棄去上清液；沉淀物中加1.0ml/g冰凍的胞核蛋白提取工作液, 在4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下18000g離心10分鐘，上清液為細胞核蛋白，轉(zhuǎn)入EP管并保存；
3.3胞膜蛋白的提取在步驟3.2中的沉淀物中加1.0ml/g冰凍的膜蛋白提取工作液, 在4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下18000g離心10分鐘，上清液為細胞膜蛋白，轉(zhuǎn)入EP管并保存；
3.4結(jié)構蛋白的提取
3.4.1在步驟3.3中的沉淀物中加入常溫或37℃水浴過的透明的結(jié)構蛋白提取工作液0.5ml/g，震蕩5分鐘，4℃條件下18000g離心10分鐘，保存上清液；
3.4.2在3.4.1步中的沉淀物中加1.5ml/g冰凍的胞漿蛋白提取工作液, 在4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下18000g離心10分鐘,保存上清液；
3.4.3混合前兩步的上清液，此為骨架蛋白；
3.5待測蛋白的保存：待檢測濃度的蛋白存于-70℃。

-20℃保存，一年有效。

1、為取得最佳的使用效果，盡量避免過多的反復凍融。建議可適當分裝后使用；
2、所有接觸樣品的用具及試劑均需預冷。裂解蛋白的所有步驟都需在冰浴或4℃進行；
3、試劑盒50T是按照6孔板的單孔細胞量計算，實際使用中本套試劑足夠處理5g組織，或者1.25×108細胞，最少細胞不宜少于0.1g組織或者2.5×106。
4、結(jié)構蛋白提取液含有SDS,使用中如有沉淀水浴加熱溶解即可。
為了您的自身安全，使用試劑前，請做好防護，如穿實驗服，帶手套等。