Human EGF ELISA Kit

檢測原理：

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。特異性抗人EGF抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本和生物素化的檢測抗體，經(jīng)過孵育，樣本中存在的EGF與固相抗體和檢測抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)。洗滌后，加入顯色底物，避光顯色。加入終止液終止反應(yīng)，在450 nm波長(參考校正波長540nm或570nm)測定吸光度值。

檢測類型：雙抗夾心法

形式：預(yù)包被96孔板

檢測樣本類型：細(xì)胞上清液，血清，血漿

上樣量：100ul

試劑盒組分：

預(yù)包被96孔板、標(biāo)準(zhǔn)品、EGF檢測抗體、稀釋用緩沖液、顯色液（A、B）、洗滌液、終止液、SA-HRP、封板膜和說明書一份。

靈敏度：0.089-0.740pg/mL

檢測范圍：3.9 - 250 pg/mL

回收率范圍：96-103%

保存方法：2-8℃

標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

背景：

EGF（表皮生長因子，又稱Urogastrone）前體是生長因子EGF家族的Group I成員，分子量為185kDa。Group I成員是結(jié)合并活化表皮生長因子受體（EGF R）的分子。EGF家族成員被合成為I型跨膜（TM）蛋白，且由蛋白水解生成可溶形式。人表皮生長因子（EGF）是一個長為1185個氨基酸前體分子形式的一個片段，包含1010個氨基酸細(xì)胞外區(qū)域、21個氨基酸TM區(qū)域和153個氨基酸胞質(zhì)域。這個前體的胞外域（ECD）有三個主要的結(jié)構(gòu)模塊。其中包括9個BLDLR重復(fù)、1個血管性血友病因子A區(qū)域和9個類EGF重復(fù)，并在近膜區(qū)包含了成熟EGF分子的53個氨基酸的結(jié)構(gòu)（為前體形式的第971位至1023位氨基酸）。這個跨膜185kDa的亞型（氨基酸21-1023），存在于大多數(shù)體液中。這個過程同時產(chǎn)生了大量40-100kDa的蛋白片段，可能為蛋白水解降解產(chǎn)物。6kDa成熟EGF亞型的產(chǎn)生過程尚不清楚。它可能源自細(xì)胞內(nèi)部，也可能源于細(xì)胞表面，通過細(xì)胞表面的膜結(jié)合絲氨酸酶水解可溶性的160kDa前體或這個前體水解以后生產(chǎn)的70kDa的分子亞型而來。

值得注意的是，成熟形式的EGF、185kDa跨膜蛋白、已被水解但尚未加工的循環(huán)型分子和160kDa前體分子都具有生物學(xué)活性。而這些生物學(xué)活性主要是因?yàn)橛蠩GF肽段嵌入在這些前體分子中。其它類型EGF的修飾都不具備結(jié)合EGF受體的活性。編碼EGF的基因在表達(dá)EGF蛋白過程中存在4種可能的剪切體，但都不影響成熟EGF的序列。其中兩種剪切體發(fā)生在胞外區(qū)序列，分別刪除了第913位至953位的氨基酸和第314至355位的氨基酸。另外兩種剪切體則涉及EGF的胞內(nèi)區(qū)域，分別以12個氨基酸替換了第1125位至1207位的氨基酸和以17個氨基酸替換了第1136-1207位的氨基酸。成熟的人EGF與小鼠、大鼠和豬的EGF的同源性分別是70%、70%和85%。已知表達(dá)EGF 的細(xì)胞包括血小板、大腦神經(jīng)元、星狀膠質(zhì)細(xì)胞和小腦浦肯野細(xì)胞、布魯納細(xì)胞（十二指腸）和頜下腺細(xì)胞、不著色的纖毛上皮和垂體前葉細(xì)胞。EGF有許多不同的生理作用。目前廣泛認(rèn)可的EGF功能主要基于EGF受體-配體的結(jié)合而實(shí)現(xiàn)。而EGF受體也能和其它EGF家族的蛋白結(jié)合，進(jìn)而形成異源多聚體并與其它EGF受體家族成員二聚化，或者和其它跨膜蛋白如PDGF R?和HGF受體產(chǎn)生關(guān)聯(lián)。在任何一種情況下，EGF都可以對胎兒和成人組織產(chǎn)生作用。在胎兒，EGF影響雙陰性-雙陽性階段的胸腺細(xì)胞生長和分化。在神經(jīng)元形成過程中，EGF似乎也可以刺激神經(jīng)膠質(zhì)神經(jīng)元的生成并促進(jìn)其上皮化。后，它能抑制脂肪細(xì)胞的成熟，從而增加前脂肪細(xì)胞數(shù)量。在成人，EGF可以在乳腺的乳生成過程中發(fā)揮作用，也可使纖維細(xì)胞有絲分裂，ECM離解和遷移，廣泛地影響生長因子相關(guān)的各種作用。

EGF受體即表皮生長因子受體（也稱為HER1和ErbB1），其激活機(jī)制尚不明確。目前的研究認(rèn)為每一個EGF分子和一個EGF受體分子有兩個結(jié)合位點(diǎn)，這會迫使受體產(chǎn)生構(gòu)象變化，而和第二個EGF-EGF R復(fù)合物結(jié)合。這種二聚體即具有實(shí)際功能的EGF受體。ErbB2也可以和EGF受體形成異源二聚體，但不能和EGF結(jié)合。這可能是因?yàn)镋rbB2 天然以二聚體的形式存在，掩蓋了其配體結(jié)合的位點(diǎn)，而使配體無法與其結(jié)合。因此，它需要結(jié)合一個已經(jīng)激活的EGF-EGF R復(fù)合體才能形成一個功能性的EGF受體。而由于內(nèi)在的靜電斥力作用，ErbB2自身無法形成同源二聚體。EGF也只有在高濃度的環(huán)境下也能和ErbB3：ErbB2形成異源多聚體。這個過程的重要性，目前仍是未知的。EGF R的選擇性剪切亞型存在于腫瘤細(xì)胞中，并可能參與腫瘤發(fā)生或使細(xì)胞對EGF 受體抑制劑敏感。