蛋白純化磁珠/試劑盒——高效捕獲目標分子

實驗原理

蛋白純化磁珠/試劑盒基于特異性生物分子相互作用實現(xiàn)目標分子的精準捕獲與純化。磁珠表面修飾有高親和力的配體（如抗體、鏈霉親和素、His標簽結(jié)合基團等），可與目標蛋白特異性結(jié)合。例如，抗體偶聯(lián)磁珠通過抗原-抗體結(jié)合原理選擇性吸附目標蛋白，而鏈霉親和素磁珠則利用生物素-親和素的高親和力捕獲生物素化分子。

結(jié)合后，通過磁力分離技術(shù)快速將磁珠-目標分子復(fù)合物與雜質(zhì)分離，再經(jīng)洗滌去除非特異性吸附，最終通過改變緩沖液條件（如pH調(diào)整、競爭性洗脫）釋放高純度目標產(chǎn)物。該技術(shù)兼具高效、溫和、可自動化等優(yōu)勢，適用于復(fù)雜樣本（如血清、細胞裂解液）中微量目標的純化。

實驗步驟（以抗體偶聯(lián)磁珠為例）

1、樣本預(yù)處理

離心去雜：將樣本（如血清）以3000g離心10分鐘，去除細胞碎片或顆粒物。

裂解（可選） ：若目標為細胞內(nèi)成分，使用裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑）處理樣本，超聲破碎后離心取上清。

2、磁珠孵育

磁珠活化：渦旋混勻磁珠懸液，取適量磁珠置于離心管中，用預(yù)冷PBS洗滌2次以去除儲存液。

結(jié)合目標分子：將預(yù)處理樣本與磁珠混合，室溫旋轉(zhuǎn)孵育30分鐘，確保充分接觸。

3、磁分離與洗滌

磁吸去上清：將離心管置于磁力架上靜置2-3分鐘，待溶液澄清后吸棄上清。

洗滌雜質(zhì)：加入洗滌緩沖液（如含0.1% Tween-20的PBS），輕柔重懸磁珠，重復(fù)磁吸步驟2-3次以去除非特異性結(jié)合。

4、目標分子洗脫

競爭性或條件洗脫：

酸性洗脫：加入低pH緩沖液（如pH 2.8甘氨酸-HCl），孵育5分鐘，中和后立即轉(zhuǎn)移上清以保護目標活性。

生物素競爭：對于鏈霉親和素磁珠，加入過量游離生物素競爭性解離目標分子。

磁珠再生（可選） ：部分試劑盒支持磁珠再生，通過去離子水、再生緩沖液處理后可重復(fù)使用。

總耗時：約60分鐘，批間差異<5%，回收率可達90%以上。

產(chǎn)品優(yōu)勢

• 釋放微球，擺脫樣品體積、試劑流速、層析柱壓力和洗脫體積的限制。

• 同時實現(xiàn)固液和液液分離，簡化步驟，減少損耗，節(jié)省時間。

• 突破分泌蛋白和包涵體蛋白純化的技術(shù)瓶頸。

• 減少對儀器設(shè)備的依賴，降低維護和保養(yǎng)成本。

• 操作穩(wěn)定，便于高通量和大規(guī)模蛋白純化。

• 產(chǎn)品性能穩(wěn)定，批次間差異小。

• 實現(xiàn)高產(chǎn)率、高純度的目標蛋白。

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