標簽蛋白純化填料解決方案

更新時間：2025-02-11 點擊次數：376

一、背景介紹

Ni-IDA Pharose FF是含亞氨基二乙酸(iminodiacetic acid, IDA)基團的金屬螯合填料，以瓊脂糖微球為基質，通過活化偶聯亞氨基二乙酸(IDA)，再螯合Ni2+。適用于大部分帶組氨酸標簽(His-tag)蛋白的親和層析。

Ni-NTA Sepharose FF是含次氮基三乙酸(NTA)基團的金屬螯合填料，以瓊脂糖微球為基質，通過活化偶聯次氮基三乙酸(NTA)，再螯合Ni2+。與亞氨基二乙酸(IDA)相比，具有更好的螯合劑、還原劑、堿性的耐受性。主要用于帶組氨酸標簽(His-tag)蛋白的親和層析。

圖1 Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF系列使用流程圖

圖2 Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF系列使用流程圖

二、標簽蛋白純化填料參數

類別	Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF	Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF
基質	6%交聯瓊脂糖
配基	亞氨基二乙酸，~30μmol Ni2+/mL	次氮基三乙酸，~17μmol Ni2+/mL
粒徑范圍^a	45~165μm
平均粒徑	~90μm
動態結合載量^b	≥40mg/mL帶組氨酸標簽蛋白
推薦工作流速	60~300cm/h
最大流速與壓力	＞1500cm/h，0.5MPa
使用 pH	4~8.5（推薦的工作pH），3~12（長期穩定）；2~14（短期穩定）
化學穩定性	在以下溶液中穩定：常用的水相緩沖液、1mol/L氫氧化鈉、8mol/L尿素、6mol/L鹽酸胍、70%乙醇等

注：

a：90%體積以上的微球在此粒徑范圍；

b：DBC10%測試條件為：10%流穿，大腸桿菌表達帶組氨酸標簽的重組蛋白，6min停留時間。

三、應用數據：

圖3 Lane M： Marker

Lane 1 ：Start material

Lane 2: Flowthrough 1

Lane 3: Flowthrough 2

Lane 4: Elution (20 mM Imidazole)

Lane 5: Elution (50 mM Imidazole)

Lane 6: Elution (100 mM Imidazole)

Lane 7: Elution (200 mM Imidazole)

Lane 8: Elution (300 mM Imidazole)

Lane 9: Elution (500 mM Imidazole)

填料： Ni-IDA 瓊脂糖凝膠FF（重力預裝柱）（Cat: abs91007-G），1mL

樣品：his6 -tagged recombinant Streptococcus Protein G produced in E. coli

結合緩沖液：20mM PB, 150mM NaCl, pH7.4

洗脫緩沖液：20mM PB, 150mM NaCl, 20-500 mM Imidazole, pH7.4

圖4 填料：Ni-NTA 瓊脂糖凝膠FF（中壓預裝柱）（Cat: abs91008-M），1mL

樣品：his6 -tagged recombinant Streptococcus Protein G produced in E. coli

結合緩沖液：20mM PB, 150mM NaCl, pH7.4

洗脫緩沖液：20mM PB, 150mM NaCl, 20-500 mM Imidazole, pH7.4

表 NTA系列?屬螯合填料的耐受性

類型	Ni-NTA 瓊脂糖凝膠FF
螯合劑 1 mM EDTA
螯合劑 2 mM EDTA
螯合劑 5 mM EDTA
螯合劑 10 mM EDTA
還原劑 20 mMDTT
還原劑 20 mM BME
還原劑 5 mM TCEP
還原劑 20 mM TCEP
還原劑 10 mM GSH
變性劑 8 M 尿素
變性劑 6 M 鹽酸胍
去污劑 2% 曲拉通 X-100
去污劑 2% 吐溫 20
去污劑 2% 吐溫 80
堿 1 M 氫氧化鈉

四、愛必信標簽蛋白純化填料產品信息

貨號	產品名稱	規格
abs91007-F	Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF	10mL/100mL
abs91007-M	Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱)	1mL/5mL
abs91007-G	Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF(重力預裝柱)	1mL/5mL
abs91008-F	Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF	10mL/100mL
abs91008-M	Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱)	1mL/5mL
abs91008-G	Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF(重力預裝柱)	1mL/5mL

Absin產品線：

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