關于WB實驗中的marker，你應該知道的事

1、什么是蛋白marker？

蛋白Marker，也稱為蛋白質分子量標準（Protein Molecular Weight Marker），是用于蛋白質電泳分析中的一系列已知分子量的蛋白質混合物。它們通常包含多個不同分子量的蛋白質條帶，這些條帶在電泳過程中會根據分子量的大小和電荷差異遷移不同的距離，從而在凝膠上形成一系列有序的條帶。

2、Marker在WB中的作用？

分子量標定：Marker包含一系列已知分子量的蛋白質，通過與Marker上的帶狀蛋白質帶進行比較，可以精確地確定待測蛋白的分子量；

驗證電泳和轉印效果：Marker在電泳和轉印的過程中移動到膜上，可以幫助研究者驗證這些步驟的效果。通過檢查Marker的帶狀分布，可以確保電泳和轉印過程中沒有發生異常；

確定蛋白質遷移距離：通過測量Marker的遷移距離，可以估算待測蛋白質的遷移距離。這對于進一步的數據分析和結果解釋非常重要；

標定凝膠濃度：Marker還可以用于幫助研究者選擇適當的凝膠濃度。不同分子量的Marker在不同的凝膠濃度下會產生不同的遷移模式，因此可以根據Marker的遷移特性選擇合適的凝膠濃度。

3、Marker有哪些分類，各有什么特點？

● 天然蛋白Marker：

這類Marker是從自然來源提取的蛋白質，它們經歷了天然的修飾過程，如裂解、二硫鍵形成、糖基化或磷酸化，并保持其復雜的3D結構。天然蛋白Marker更接近其在體內的自然狀態，這使得它們在藥物開發和生物醫學研究中非常有用。天然蛋白Marker可以提供更準確的分子量估計，因為它們未經過重組或合成，保持了蛋白質的自然特性。abs9919非變性蛋白Marker (66-669kDa)，經過非變性電泳后，用考馬斯亮藍染色后可以得到分布均勻、密度相近的4條帶，不適用于SDS-Page，因為在SDS存在下，含有多個亞單位的蛋白會不同程度解聚。

abs9919非變性蛋白Marker(66-669kDa)

● 變性Marker：

這類Marker在生產過程中經過了變性處理，通常是通過加熱和化學物質（如SDS）的處理，以確保蛋白質wan全展開成線性結構。變性Marker的優點在于它們提供了一致的蛋白質遷移特性，這對于精確的分子量估計和實驗重復性非常重要。由于變性處理，這類Marker的蛋白質保持一致的電荷和形狀，使得它們在電泳過程中的遷移更加可預測。

變性蛋白Marker一般可分為預染和非預染兩種

● 未預染蛋白Marker：

這類Marker包括寬分子量、高分子量和低分子量蛋白標準。它們是較簡單、較準確的一種，因為不附帶染料分子或標記分子，所以所示大小正好是蛋白原本的大小。缺點是在電泳過程中不可見，需要在電泳結束后經過染色才能看到，無法實時監控電泳過程。適合精確判斷蛋白大小，但操作相對麻煩，需要額外的染色步驟。如abs9840非預染蛋白Marker (14.4-97.4kDa)，用考馬斯亮藍R-250染色可得分布均勻密度相同的六個條帶，產品含SDS, 不適合用于非變性膠。

abs9840非預染蛋白Marker(14.4-97.4kDa)

● 預染蛋白Marker：

這類Marker在生產時就結合了染料，因此在電泳過程中或轉膜時可以直接觀察到不同顏色的條帶。預染蛋白Marker方便實驗人員在電泳時、電泳后，以及轉膜后監測電泳情況和估計遷移率。又分為單色預染和多色預染。單色預染Marker通常會利用其中某些條帶加倍濃度來提示其大小，而多色預染Marker用不同的顏色來區別，更易于辨認 。需要注意的是，預染蛋白Marker與染料共價耦聯，所以在不同的緩沖條件下電泳時遷移特性可能會發生某些變化，可能導致一些偏差，因此不太適合精確定位蛋白。

abs923預染蛋白Marker(10-245kDa)

● 預染發光Western Marker：

傳統的Western Blot試驗需要使用預染蛋白Marker來跟蹤檢測陽性抗原信號和轉膜效率，但預染蛋白Marker無法在膠片上曝光，曝光信號需要根據膜上的預染蛋白Marker來判斷。absin新品abs90004 預染發光Western Marker由9種發光蛋白和9種預染蛋白組成；9中發光蛋白分別為23、30、36、44、50、62、90、120和160KDa，這些蛋白均可與抗體結合，因此能與抗原在同一張膜上曝出信號，陽性信號可以直接通過Western Marker的位置來判斷；9種預染蛋白分別為15、25、35、40、55、70、100、130和180KDa，其中70KDa為紅色，其他為藍色，轉膜完畢后在膜上肉眼可見。

1）可與抗原同時檢測信號，使Western blot結果判斷更加簡便；

2）發光marker沒有偶聯和標記其他分子，分子量更加準確；

3）綜合發光marker和預染marker的優勢，既能監測轉膜又能與抗原同時檢測。

HRP標記的Goat anti mouse IgG二抗(一抗：mouse anti P38)ECL化學發光檢測

多重熒光檢測

按照分子量又可以將marker分為高分子量、低分子量、寬分子量等。高分子量蛋白Marker是指那些用于檢測大分子量蛋白質的標記，通常包含的蛋白質分子量范圍較高，它們提供的分子量范圍通常從幾十kDa到幾百kDa不等。低分子量蛋白Marker是指用于檢測小分子量蛋白質的標記，通常包含的蛋白質分子量范圍較低，從幾kDa到幾十kDa的分子量范圍。寬分子量蛋白Marker是指覆蓋寬廣分子量范圍的標記，通常包含從低到高多個分子量的蛋白質。

4、如何選擇marker？需要考慮什么因素？

首先看實驗類型，非變性蛋白需要非變性蛋白marker，變性蛋白則需要變性marker，兩者不可以相互替換，然后看目的蛋白大小，選擇相應的marker，在可選條件下，寬分子量蛋白marker，是不錯的選擇，另外看實驗要求，如果需要在電泳和轉印過程中檢測，需要選擇預染marker，如果需要精確的條帶分子量大小，則需要非預染marker做參考，可以同時使用預染marker和非預染marker，除了以上因素，還需要考慮marker的使用體系，absin常見marker信息如下：

非變性蛋白電泳好物推薦

WB好物推薦

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