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                mRNA常見FAQ合集Ⅰ/有問題先找FAQ!

                更新時間:2023-06-19      點擊次數(shù):1312

                Q1:線性mRNA各組件概念及功能?



                圖1 線性mRNA結(jié)構(gòu)示例

                 

                A1(1)5’-Cap:通常作為mRNA的起始結(jié)構(gòu),帽子結(jié)構(gòu)可以使得mRNA進入體內(nèi)以后開始翻譯,并維持mRNA的穩(wěn)定性。

                2)UTR(Untranslated Regions):即非翻譯區(qū),是mRNA分子兩端的非編碼片段。5'-UTR從mRNA起點的甲基化鳥嘌呤核苷酸帽延伸至AUG起始密碼子,3'-UTR從編碼區(qū)末端的終止密碼子延伸至多聚A尾巴(Poly-A)的前端。5'-UTR,可以提高mRNA在體內(nèi)翻譯的效率;3'-UTR,可以提高mRNA的翻譯效率。

                3)CDS序列(Coding sequences):一般可以在NCBI上查到,是與蛋白區(qū)域一一對應(yīng)的序列,并且序列中間不存在其他與蛋白無關(guān)的序列,和真實情況最為接近。不同物種的CDS序列有一定的偏好性,因此,對CDS區(qū)域進行廣泛的篩選和設(shè)計顯得尤為關(guān)鍵,優(yōu)化的CDS區(qū)域不僅可以提高mRNA的翻譯效率,同時修飾堿基的使用,可以進一步的降低mRNA在體內(nèi)的免疫原性,增強藥物表現(xiàn)。開放閱讀框ORF(Open reading frame)它是理論上的蛋白編碼區(qū),一般是先在序列中尋找起始密碼子(AUG)對應(yīng)的序列ATG,然后按每3個堿基一組向后延伸,一直到出現(xiàn)終止密碼子(UAG、UGA、UAA)對應(yīng)的序列。

                4)Poly(A)tail:進一步提高mRNA的穩(wěn)定性,提高mRNA的翻譯效率。



                Q2:環(huán)狀RNA中IRES結(jié)構(gòu)及功能



                圖2 環(huán)狀mRNA結(jié)構(gòu)示例

                 

                A2:IRES為核糖體的結(jié)合位點,該結(jié)構(gòu)可啟動環(huán)狀mRNA的翻譯,它跟線性mRNA的帽結(jié)構(gòu)類似。IRES避免了環(huán)狀mRNA必須添加昂貴的5’端帽子和繁瑣的Poly(A)尾巴。



                Q3:環(huán)狀RNA環(huán)化的方式是什么?

                A3參考Anderson發(fā)表的文章,本公司環(huán)狀mRNA環(huán)化的方式是添加同源臂內(nèi)含子自剪切方式。



                Q4:線性mRNA5種修飾堿基各有什么區(qū)別和作用?

                A4不同核苷酸修飾表現(xiàn)出不同的功能和作用,其中假尿苷修飾和甲基假尿苷修飾是應(yīng)用最為廣泛的,具體選擇哪一種修飾應(yīng)當根據(jù)實驗確定。

                (1)Pseudo-UTP(Ψ)假尿苷:改變密碼子、增強轉(zhuǎn)錄本穩(wěn)定性和應(yīng)激反應(yīng)應(yīng)答。降低mRNA免疫原性,提高mRNA穩(wěn)定性并增強其翻譯能力;

                (2)N1-Methylpseudo-UTP(mΨ)甲基假尿苷:通過增加核糖體密度以elF2α依賴性和獨立機制增強翻譯,比假尿苷修飾更能降低mRNA免疫原性,并可增強mRNA的蛋白表達能力;

                (3)N6-Methyl-ATP(m6A):與mRNA穩(wěn)定性、剪接加工以及microRNA 加工有關(guān),可促進mRNA翻譯;

                (4)5-Methyl-CTP(5mC):5mC修飾連同多種效應(yīng)酶,執(zhí)行多種功能; 5mC的分布因細胞類型而異,在mRNA特定位置上的5mC修飾表現(xiàn)出不同的調(diào)控活性:它們可以促進或抑制翻譯;

                (5)5-Methoxy-UTP(5moU):可以降低所得mRNA的免疫原性,促進蛋白表達,對炎性巨噬細胞反應(yīng)的誘導可忽略不計。



                Q5:修飾堿基、帽結(jié)構(gòu)一般推薦什么或者通用的是什么?

                A5:我司一般用N1-甲基-假尿苷(N1-Methylpseudo-UTP)修飾堿基進行合成產(chǎn)品。通用帽結(jié)構(gòu)采用的是Cap1 AG(化學共轉(zhuǎn)錄法加帽),客戶若有附加質(zhì)控,我們可提供Cap ratio檢測。

                 

                Q6Fluc mRNA表達的是什么熒光素?

                A6FLuc mRNA表達了一個最初從螢火蟲中提取的螢光素酶蛋白,可以催化螢火蟲螢光素D-Luciferin氧化成發(fā)光物質(zhì),發(fā)出黃綠色螢光。



                Q
                7:Fluc-mRNA帶cy5熒光標記,做實驗的時候需要避光嗎?

                A7:最好將Fluc-mRNA進行避光實驗操作、避光保存,因為要防止熒光淬滅影響實驗結(jié)果。



                Q8:mRNA保存條件是什么?

                A8需要低于-40°C保存,-80℃冰箱或液氮保存都可以,愛必信所提供的均為新鮮生產(chǎn)的產(chǎn)品,為了達到最佳使用效果,請在收到貨物的2個月內(nèi)使用。若不小心將mRNA短期(例如1天)存放于-20℃,可以在正式實驗之前將mRNA跑瓊脂糖凝膠電泳看其是否降解。


                Q9:mRNA未添加帽結(jié)構(gòu)一般可以存放多久呢?

                A9mRNA添加了加帽結(jié)構(gòu)我們建議可以-40℃保存2個月,未加帽的mRNA需要盡快使用,因為未添加帽結(jié)構(gòu)的mRNA穩(wěn)定性會降低,mRNA會受到核酸外切酶的降解。 


                Q10:mRNA保存液主要有哪幾種?有什么區(qū)別?

                A10:我司的mRNA保存溶劑主要有檸檬酸鈉鹽溶液和無核酸酶水兩種。檸檬酸鈉鹽溶液更適合動物體內(nèi)的生理環(huán)境,如果是注射動物可以選擇用檸檬酸鈉鹽溶液保存mRNA;如果是mRNA做包裹后推薦使用無核酸酶水進行保存;如果是做細胞處理實驗,無核酸酶水及檸檬酸鈉鹽溶液都可以選擇,任選其一即可。


                Q11:工具RNA的溶劑是什么?

                A11我司的工具mRNA通用溶劑一般是1mM檸檬酸鈉鹽溶液,pH為6.4。


                工具mRNA --線性mRNA

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                Fluc mRNA

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                ECFP mRNA

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                mtangerine mRNA

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                abs60191

                Cre mRNA

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                abs60194

                EPO mRNA

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                abs60312

                OVA mRNA

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                abs60315

                β-gal mRNA

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                新鮮現(xiàn)貨

                備注:所有線性RNA均使用Cap AG結(jié)構(gòu)共轉(zhuǎn)錄加帽,修飾堿基5種可任選其一(5-Methoxy-UTP,5-Methyl-CTP,N1-Methylpseudo-UTP,N6-Methyl-ATP,Pseudo-UTP。)

                 




                工具mRNA --環(huán)狀mRNA

                貨號

                產(chǎn)品名稱

                規(guī)格

                產(chǎn)品特征

                abs60332

                Endless  eGFP mRNA

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                WB相關(guān):ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;激動劑/抑制劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒;重組蛋白;抗體: 二抗、標簽抗體、對照抗體;定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...

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