Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)攻略

Caco-2細(xì)胞分離自一名72歲男性的直腸原位癌細(xì)胞，當(dāng)長(zhǎng)到滿時(shí)表現(xiàn)出特征性的腸上皮細(xì)胞分化。因此，Caco-2細(xì)胞模型是十幾年來(lái)國(guó)外廣泛采用的一種研究藥物小腸吸收的體外模型，具有相對(duì)簡(jiǎn)單、重復(fù)性較好、應(yīng)用范圍較廣的特點(diǎn)。

表1 Caco-2細(xì)胞基本信息

圖1 Caco-2（人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞）

首先，我們要討論的第一個(gè)問(wèn)題是如何判斷細(xì)胞狀態(tài)好不好？為了更直觀地了解細(xì)胞狀態(tài)，我們可以看一下如下圖2和圖3。正常的Caco-2細(xì)胞呈島狀生長(zhǎng)，細(xì)胞間連接緊密，細(xì)胞群的邊界光滑，細(xì)胞群中常常含有巨大的空泡（屬于正常現(xiàn)象）。

圖2 Caco-2正常形態(tài)

圖3 Caco-2正常形態(tài)

接下來(lái)，我們討論第二個(gè)問(wèn)題是該細(xì)胞消化難問(wèn)題。該類細(xì)胞間連接緊密，細(xì)胞難以消化解離，并且培養(yǎng)時(shí)間越久，細(xì)胞間連接越緊密越難消化。所以，消化時(shí)要注意以下幾點(diǎn)：

1、消化前用PBS（abs9459）清洗細(xì)胞兩遍；
2、消化時(shí)間控制在5-10分鐘，當(dāng)細(xì)胞能夠被吹散為小的細(xì)胞團(tuán)塊時(shí)，即可終止消化；
3、消化吹打成單個(gè)細(xì)胞再進(jìn)行傳代。

最后，我們要討論的是細(xì)胞貼壁和增殖緩慢問(wèn)題。尤其剛復(fù)蘇時(shí)細(xì)胞貼壁特別慢，一般2到3天貼壁展開(kāi)（還可能會(huì)有空泡）；有少量發(fā)亮的細(xì)胞漂浮或黏附在細(xì)胞克隆上是正常的，隨后會(huì)進(jìn)入克隆并正常生長(zhǎng)；為避免在細(xì)胞附著初期干擾細(xì)胞，建議到第三天再換液。

同時(shí)該細(xì)胞增殖緩慢，倍增時(shí)間約為72小時(shí)，按1:3傳代的情況下，約一周傳代一次。由于該細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)需求高，建議使用20%的優(yōu)級(jí)胎牛血清（abs972）。如果細(xì)胞隨著培養(yǎng)過(guò)程，漂浮得越來(lái)越嚴(yán)重，甚至大塊兒飄起，就要檢查培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)環(huán)境是否出現(xiàn)異常。

本期講解就到這里了，如有細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題，歡迎掃碼加入我們微信群交流。

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 表2 小愛(ài)推薦細(xì)胞培養(yǎng)類產(chǎn)品

Absin特色產(chǎn)品線：

WB相關(guān)：ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠；IHC相關(guān)：二抗試劑盒、組化筆；IP/CoIP試劑盒；激動(dòng)劑/抑制劑；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡試劑盒；呼吸爆發(fā)試劑盒；ELISA試劑盒；重組蛋白；抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對(duì)照抗體；定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...