SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)攻略

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（SH-SY5Y） 是于1970年建自骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細(xì)胞瘤 SK-N-SH細(xì)胞系經(jīng)3次克隆后的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。該細(xì)胞的密度可高達(dá)106 cells/cm2，具有中等水平的多巴胺β羥化酶的活性。基本形態(tài)上皮樣，多數(shù)貼壁，少數(shù)懸浮； 營(yíng)養(yǎng)體系：推薦DMEM：F12(abs9561)+10%FBS(abs972)+1%P/S（abs9244）。

表1 SH-SY5Y細(xì)胞基本信息

圖1 SH-SY5Y（人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞）

首先，我們討論的是SY5Y五天傳一代算不算正常？SH-SY5Y 增殖緩慢，再加上喜歡聚團(tuán)生長(zhǎng)，鏡下觀察融合率不高，但細(xì)胞簇實(shí)際密度大，需要5-7天才能達(dá)到80%以上的融合率，所以5-7天傳一代很正常（如圖2所示，融合率約為70%的SY5Y）。如果細(xì)胞培養(yǎng)達(dá)到一周都無(wú)法傳代，建議把細(xì)胞消化下來(lái)，接種到更小的孔板中，增加細(xì)胞密度，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。

接下來(lái)我們討論第二個(gè)話題SY5Y懸浮細(xì)胞過(guò)多正不正常？SY5Y的生長(zhǎng)特點(diǎn)為大部分貼壁，呈上皮樣，有短觸角延伸出來(lái)，傾向于成簇生長(zhǎng)，容易成團(tuán)；少部分懸浮，圓潤(rùn)有光澤。 如果SY5Y出現(xiàn)大量懸浮是不正常現(xiàn)象。如圖3所示，懸浮細(xì)胞居多的SY5Y。

圖2 懸浮細(xì)胞居多的SY5Y

如何解決這種情況呢？如果貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好、密度適中，可以舍棄懸浮細(xì)胞；如果貼壁細(xì)胞很少，用胰酶消化并離心，將細(xì)胞用新鮮的完培重懸并接種到培養(yǎng)瓶，隔段時(shí)間觀察細(xì)胞是否貼壁。

最后我們討論一下不同營(yíng)養(yǎng)體系培養(yǎng)的SY5Y形態(tài)差異大不大。我們對(duì)比了兩種營(yíng)養(yǎng)體系培養(yǎng)的SY5Y細(xì)胞形態(tài)。體系一是DMEM+20%FBS-熱滅活，體系2是DMEM-F12 + 10%FBS（如圖4所示）。在培養(yǎng)的第2天和第5天進(jìn)行了相應(yīng)的形態(tài)比較。傳代第2天，低密度下，兩種營(yíng)養(yǎng)體系培養(yǎng)的SY5Y形態(tài)沒有明顯區(qū)別，均為少數(shù)懸浮，多數(shù)呈上皮樣，有短觸角延伸出來(lái)，傾向于聚團(tuán)生長(zhǎng)；傳代第5天，體系2培養(yǎng)的SY5Y團(tuán)塊話過(guò)于嚴(yán)重，細(xì)胞黏在一起，細(xì)胞輪廓難以分辨清楚，體系1細(xì)胞有略微聚團(tuán)（SY5Y本身有聚團(tuán)生長(zhǎng)特性），細(xì)胞形態(tài)正常。體系1更適合細(xì)胞增殖。

圖3 兩種營(yíng)養(yǎng)體系培養(yǎng)的SY5Y形態(tài)對(duì)比圖（兩種營(yíng)養(yǎng)體系所用血清批號(hào)一致）

本期講解就到這里了，下一期您想了解哪種細(xì)胞的培養(yǎng)攻略呢？歡迎留言評(píng)論哦。如有細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題，歡迎掃碼加我微信哦。

Absin（優(yōu)寧維-愛必信）-小武

細(xì)胞形態(tài)異常，"望、聞、問(wèn)、切"，我給您的細(xì)胞"把把脈"

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貨號(hào)	品名	規(guī)格
abs977	胎牛血清（特級(jí)）	500ml
abs972	胎牛血清（優(yōu)級(jí)）	500ml
abs974	胎牛血清（標(biāo)準(zhǔn)級(jí)）	500ml
abs9483	高糖DMEM培養(yǎng)基	500ml
abs9484	RPMI-1640培養(yǎng)基	500ml
abs9505	MEM培養(yǎng)基	500ml
abs9506	α-MEM培養(yǎng)基	500ml
abs9554	Ham's F-12	500ml
abs9561	DMEM/F-12培養(yǎng)基	500ml
abs962	PBS緩沖液	500ml
abs970	D-PBS緩沖液（1×，無(wú)鈣鎂）	500ml
abs971	D-PBS緩沖液（含 Ca2+ Mg2+）	500ml
abs9257	Hanks平衡鹽溶液（不含Ca2+ Mg2+,無(wú)酚紅）	500ml
abs9258	Hanks平衡鹽溶液（含Ca2+ Mg2+,無(wú)酚紅）	500ml
abs47014938	胰蛋白酶-EDTA消化液（0.25%），含酚紅	100ml
abs47047375	胰蛋白酶-EDTA消化液（0.25%），不含酚紅	100mL
abs9479	無(wú)DMSO無(wú)血清細(xì)胞凍存液	100mL
abs9417	無(wú)血清細(xì)胞凍存液	100mL
abs9473	細(xì)胞凍存液（含血清）	100mL
abs9474	組織保存液	100ml
abs9480	組織凍存試劑盒	30ml
abs9486	模具	1個(gè)/套
abs9487	小刀	5片/包
abs9481	組織復(fù)蘇試劑盒	50ml
abs42020125	卡那霉素B硫酸鹽	250mg
abs42018967	硫酸慶大霉素溶液	10ml
abs9244	青鏈雙抗	100ml
abs9245	青霉素-鏈霉素-慶大霉素混合溶液	100ml
abs44071148	制霉菌素	1g
abs9252	支原體檢測(cè)試劑盒	100T
abs9375	支原體清除試劑	200uL×5
abs9376	支原體預(yù)防	500uL×4
abs816578	環(huán)丙沙星鹽酸鹽	500mg
abs9374	水盤抑菌劑	20ml
abs9371	水浴鍋抑菌劑	100ml
abs9372	培養(yǎng)箱除菌劑	480ml
abs9373	細(xì)胞房除菌劑	480ml

 

Absin特色產(chǎn)品線：
WB相關(guān)：ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠；IHC相關(guān)：二抗試劑盒、組化筆；IP/CoIP試劑盒；激動(dòng)劑/抑制劑；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡試劑盒；呼吸爆發(fā)試劑盒；ELISA試劑盒；重組蛋白；抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對(duì)照抗體；定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...