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                正確處理樣本是保證ELISA檢測正確性和準(zhǔn)確性重要步驟

                更新時(shí)間:2022-11-27      點(diǎn)擊次數(shù):1109
                   通常我們用ELISA來檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的第一步。
                  1.血清
                  血清是常用于ELISA檢測的一類樣本,處理也比較簡單。用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本,將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃一個(gè)晚上,使血清析出。(最好將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的析出)。4℃1000×g離心20分鐘,仔細(xì)收集上清。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
                  采血過程中應(yīng)避免溶血,因?yàn)榧t細(xì)胞裂解時(shí)會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì),在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,而導(dǎo)致檢測的不準(zhǔn)確性。同時(shí)也應(yīng)避免細(xì)菌污染,因?yàn)榫w內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測的假陽性。
                  2.血漿
                  ELISA實(shí)驗(yàn)用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本,標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等,檢測時(shí)還應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒說明書,檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。
                  3.細(xì)胞培養(yǎng)上清
                  取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管,1000×g離心20min,除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì),取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
                  4.細(xì)胞裂解液
                 ?。?)吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,用胰酶消化細(xì)胞,加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省略。
                  (2)收集細(xì)胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤洗3次。
                  (3)加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。
                  (4)將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復(fù)凍融幾次,使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以達(dá)到裂解的目的。
                  (5)4℃10000×g離心10min,除去細(xì)胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
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