如何把細胞培養板鋪的平整

　　做貼壁細胞的實驗，經常需要做細胞鋪板。這個實驗看似簡單，其實也不是那么好做的。關鍵是要鋪得均勻鋪得平整，要是中間密周圍稀，或者周圍密中間禿頂，那就露怯啦。

　　收集細胞要混勻

　　消化后的細胞一定要充分混勻，要把聚在一起的細胞團充分地吹打開，最好是單個的狀態，但同時又不能損傷細胞，可以用玻璃吸管的移液器操作。離心也很有講究，一般用1000 rpm/min即可。離心力太大細胞容易抱團！然后懸浮離心后的細胞團時，先不要把所有液體都加進去！一般先加2mL液體，然后用1mL移液器輕輕將細胞吹起，細胞要像云霧一樣散開，這樣易于形成單細胞。

　　接種細胞須小心

　　鋪6孔板，12孔板或24孔板，先在每個孔里面加1mL的培養基，晃動使之鋪勻整個孔底，然后加入1 mL的細胞懸液。從孔的左邊靠近底部慢慢加入，這樣細胞懸液會平鋪在整個孔底，細胞分散較均勻，注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。這里又有一個竅門，放在顯微鏡的載物臺上面。因為顯微鏡的載物臺是水平校正過的，比什么桌面、超凈臺什么的要平多了。在載物臺上放置20-30分鐘，細胞不差這一會溫度和二氧化碳的，等細胞貼壁了，輕輕移入到孵箱中。

　　鋪96孔板，我每孔是加100微升細胞懸液，加完半邊板48孔后，將剩下的未加的細胞懸液再混一下，再繼續加剩余的半邊板子，都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度，敲三次即可，太大力或次數太多會導致細胞集中成堆。也有人推薦輕微的左三圈、右三圈、前三圈、后三圈。

　　輕輕敲打勿抱團

　　細胞懸液加完后，將細胞培養板抬高，對著燈光，從底部往上看，看細胞有沒有抱團。如果有抱團的話，用手指從底部輕輕敲打，使之分散。也可以用平板振蕩器稍稍振蕩一下，效果不錯。參數要設置成振幅小而頻率高哈。

　　十字交叉要水平

　　觀察和敲打后放入培養箱，然后畫“十字”，就是把細胞培養板貼著培養箱擱板，前后方向來回晃動10次，再左右方向晃動10次，正好是一個“十” 字形。然后就讓它靜靜地呆在培養箱擱板上，沒事不要去動它。這里要注意的是，托架應該裝在四根立柱相同高度的孔上，培養箱的擱板要水平校正，盡量地做到水平。擱板會向一個方向傾斜，對于貼壁時間長的細胞，就算當時混勻了，放進培養箱后也搖勻了，但是重力作用下細胞也會向一側聚集。 培養箱里面或者外面盡量不要放可以產生振動的儀器，比如蠕動泵、離心機、渦旋器一類的儀器。這些儀器產生的振動對細胞貼壁有影響，也可能會導致細胞貼壁不均勻。

　　細胞培養技術指的是細胞在體外條件下的生長，在培養的過程中細胞不再形成組織(動物)。培養物是單個細胞或細胞群。細胞在培養時都要生活在人工環境中，由于環境的改變，細胞的移動或受一些其他因素的影響，培養時間加長，傳代導致細胞出現單一化型。