mIHC多色技術在三級淋巴結構TLS研究中的應用分享

三級淋巴結構TLS示意圖，圖片來源于自網絡 

本文研究了在G1/G2期非功能性胰腺神經內分泌腫瘤中三級淋巴結構TLS的分布、細胞組成、與腫瘤浸潤免疫細胞的相關性以及預后價值。其主要方法就是對取自兩個隊列的患者腫瘤組織樣本進行HE染色、IHC及mIHC染色分析。 
研究發現超過1/ 3的G1/G2期非功能性胰腺神經內分泌腫瘤樣本中發現了TLS，且位于瘤周、腫瘤組織外沿或間質區。TLS主要由帶有生發中心的B細胞濾泡和帶有樹突狀細胞的T細胞區組成。Kaplan-Meier分析顯示，TLS的存在與更長的無復發生存期(RFS, p＜0.001)和總生存期(OS, p=0.001)相關，而TLS的數量則沒有預后意義。 

三級淋巴結構TLS的IHC及組織學情況 
 

如上圖所示，研究者首先用常規IHC方法鑒定了TLS中CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD20+B細胞、CD11c+DCs、CD45RO+記憶性T細胞、NCR1+的NK細胞、FOXP3+Tregs和CD68+的腫瘤相關巨噬細胞TAMs；進而根據IHC的結果，選擇對TLS中作為主要組成的CD45RO+記憶性T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞和CD20+B細胞進行mIHC多色共定位，結果如下圖所示，深入定量分析可知TLS中占比較多的是39.35%的CD45RO+記憶性T細胞，然后是36.61%的CD20+B細胞、20.05%的CD4+T細胞以及3.99%的CD8+T細胞。

非功能性胰腺神經內分泌腫瘤樣本的mIHC多色結果
 

后續的研究，研究者探討了TLS存在與否和兩組隊列樣本無復發生存期RFS及總生存期OS的關系，結果如下圖所示，TLS顯著提升了兩組隊列RFS和OS值。

Association of the presence of TLS with RFS and OS in the Fudan cohort (A,B) and external validation set (C,D).
 

本文研究人員認為三級淋巴結構TLS在G1/G2期非功能性胰腺神經內分泌腫瘤組織中表征了一個免疫應答微環境，并且有潛力成為分析RFS和OS的一個獨立預后因素。 
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