WB實(shí)驗(yàn)中的亮眼“彩虹”——預(yù)染蛋白marker

蛋白質(zhì)印跡法(免疫印跡試驗(yàn))即Western Blot，是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是通過上樣緩沖液處理，使組織或細(xì)胞樣品中的蛋白質(zhì)帶上電荷，再進(jìn)行凝膠電泳，根據(jù)不同分子量的蛋白質(zhì)在電場中的遷移速率不同進(jìn)行區(qū)分，后將電泳分離后的細(xì)胞或組織總蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上，然后用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白質(zhì)檢測技術(shù)?，F(xiàn)已廣泛應(yīng)用于基因在蛋白水平的表達(dá)研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個(gè)方面。
 

總結(jié)起來，WB的簡要步驟如下圖所示：

圖1. Western Blot簡要操作步驟圖
 

Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠與否，除目的蛋白條帶清晰、無背景、雜帶等干擾外，分子量大小是確定目的蛋白的重要參考因素之一。如何確定蛋白的分子量大??？我們需要用到蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)（蛋白Marker）來作為丈量蛋白分子量的“尺子”。并且，蛋白Marker也是實(shí)驗(yàn)中必須的陽性對照，Marker精確無誤，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才有說服力。
 

目前常用的蛋白Marker分為非預(yù)染蛋白Marker和預(yù)染蛋白Marker。非預(yù)染(Pre Mixed)蛋白Marker在實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)，它是幾種已知分子量并純化好的蛋白質(zhì)預(yù)混液（目標(biāo)分子量也在這個(gè)范圍內(nèi)）。因?yàn)殡娪具^程中*看不到，要和目標(biāo)蛋白一起等到后經(jīng)過染色脫色后才能起指示作用，無法在實(shí)驗(yàn)中起預(yù)示作用，使用起來很不方便。
 

為了實(shí)時(shí)監(jiān)測電泳動(dòng)態(tài)，預(yù)染蛋白Marker應(yīng)運(yùn)而生。預(yù)染蛋白Marker（Prestained Marker），是將標(biāo)準(zhǔn)蛋白與染料共價(jià)耦聯(lián)，在電泳過程中或者轉(zhuǎn)膜時(shí)可以肉眼直接觀察到的一種蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)顏色又分為多色預(yù)染蛋白Marker和單色預(yù)染蛋白Marker。預(yù)染蛋白Marker可以幫助我們在電泳時(shí)、電泳后，以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測電泳情況，估計(jì)遷移率，在Western Blot轉(zhuǎn)膜以后可以直接觀察蛋白轉(zhuǎn)膜是否*等。
 

好的預(yù)染蛋白Marker，重要的兩點(diǎn)就是條帶清晰和位置準(zhǔn)確；清晰的條帶在電泳過程中，可以更好地提示我們電泳進(jìn)程，并且在轉(zhuǎn)膜后也可以作為轉(zhuǎn)膜成功與否的判斷標(biāo)準(zhǔn)；而位置準(zhǔn)確是所有marker類產(chǎn)品的*要求，只有“尺子”刻度精確，量出的結(jié)果才真實(shí)可靠，作為確認(rèn)目的蛋白的重要參考手段之一，蛋白Marker位置準(zhǔn)確，更是重中之重。當(dāng)然，在滿足這兩個(gè)前提條件下，如果再可以滿足保存時(shí)間長，不易降解，*等優(yōu)點(diǎn)那就更好了。小編在這里為您推薦兩款愛必信的預(yù)染蛋白Marker：abs922，abs924，和金標(biāo)準(zhǔn)Thermo26616分子量基本上沒有偏差，比其他公司的預(yù)染蛋白marker具有更準(zhǔn)特性。同時(shí)，條帶更為清晰銳利，上樣量少也可顯 示出清晰條帶。對比圖如下：

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