蛋白酶K是用來做什么實(shí)驗(yàn)的？

　　蛋白酶K是一種用途廣泛的非特異性的絲氨酸蛋白酶。在pH4到pH12的條件下均有活性，在SDS、尿素或EDTA存在時亦很穩(wěn)定。蛋白酶K常用于提取mRNA、基因組DNA，或用于從各種細(xì)胞中提純DNA和RNA時消化雜蛋白。還可用于糖蛋白的修飾，以及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究等方面。

　　蛋白酶K的應(yīng)用比較廣泛，它可以消化包圍靶DNA蛋白，因此使用羅氏蛋白酶K能夠增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會增強(qiáng)雜交信號，但在使用羅氏蛋白酶K時要注意使用的濃度，過高或者過低都會破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、核消失等影響試驗(yàn)結(jié)果。

　　蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用，以增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會，提高雜交信號。但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時，都會對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞，導(dǎo)致組織切片的脫落，細(xì)胞核的消失，從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用，解決上述出現(xiàn)的問題，并能達(dá)到理想的染色效果。

　　蛋白酶K的保存：保存在-20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融，有效保證12月。孵育溫度為55至65℃，理想孵育溫度為58℃，孵育時間為15分鐘至48小時;理想孵育時間為2小時。