關于Ficoll，您不得不知的那些事兒

如果想簡單、快速地分離細胞，大家反應肯定是密度梯度離心介質；如果您想分離人淋巴細胞，那當然少不了Ficoll啦。

Ficoll是蔗糖的多聚體，呈中性，平均分子量為400,000，當密度為1.2g／ml仍未超出正常生理性滲透壓,也不穿過生物膜。紅細胞、粒細胞比重大，離心后沉于管底；淋巴細胞和單核細胞的比重小于或等于分層液比重，離心后漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細胞，就可從外周血中分離到單個核細胞。

PBMC（Peripheral blood mononuclear cell），外周血單個核細胞，其細胞類型為血液中具有單個核的細胞，主要包括淋巴細胞和單核細胞等，其中淋巴細胞占很大一部分。

愛必信淋巴細胞分離介質Lymphocyte Separation Medium（human, Ficoll-Paque）是一種無菌的、即用型的Ficoll-泛影酸鈉密度梯度介質，能夠簡單快速的從少量或大量的人外周血、骨髓和臍帶血中高產和高純度的提純淋巴細胞。本品內毒素水平非常低，小于0.12EU/mL，分離所得的細胞中95%左右為單個核細胞，細胞存活率大于90%，回收率為60%左右。

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Ficoll-Paque分離人外周血PBMC的示意圖：

操作protocol：

01\ 樣本準備

將2mL外周血轉移到15mL離心管中；

用等量的2mLPBS稀釋外周血，注意吹打或顛倒混勻（如需無菌操作請在超凈臺內完成）；

02\ 分離步驟

在離心管中加入3mL 提前混勻的Ficoll-Paque（無菌操作請用注射器）；

將稀釋好的血液樣本緩慢加在Ficoll細胞分離液上，保證Ficoll與樣本之間界面清晰（注意不要吹打或顛倒混勻）；

離心300g，20℃，20min（注意要設置緩降，不能驟停）；

輕輕移除上層分離液（血漿）；

                                                       愛必信abs930 Ficoll-Paque分離淋巴細胞實驗圖

03\ 洗滌淋巴細胞

吸取“白膜層”PBMC，將其轉移到新的15mL離心管中；

加3-5倍PBS充分混勻；

離心300g，20℃，10min（*棄去上清，沉淀即PBMC細胞）；

用適量PBS重懸、進行細胞計數（當細胞量＞10E7時，要擴大相應試劑用量）；

離心300g，10min（*棄去上清）；

備注：

（1）實驗操作前，先將Ficoll-Paque和血液樣本在室溫放置一段時間，保持溫度為18℃和20℃；

（2）分離PBMC步離心的時候，一定不能設置制動或設置低水平的制動，否則將分層混亂。

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