牛垂體提取物的技術原理及使用方法

 

  牛垂體提取物高有絲分裂活性，一致的高活性生長因子和激素來源新西蘭品種，采購文檔支持，立即可用，無菌液體。角朊細胞的分離，采用中性蛋白酶及胰蛋白酶聯合消化，分離角朊細胞。具體步驟如下，取包皮環 切術切除的成人包皮，切成約015c m ×015c m 皮塊，用含青霉素 (10萬 U L ) 、 鏈霉素 (100m g L ) 的 D -H ank s 液洗 3次，加入中性蛋白酶 (D isp ase :200U m l ) , 在 4℃下，消化 18~20h分離真。表皮，表皮部分再用 0及 011%的 ED 5后 , D S 培養基 200, 1500r m in 5in , , 加入 PB S 液，重 復洗細胞 3次 , 計數細胞。角朊細胞的培養，將體外分離的細胞 分成兩部分，分別懸浮在含牛腦垂體提出物和不含牛腦垂體提出物的MB培養基中，以相同的細胞接。

 

  牛垂體提取物種密度 (50000 c m 2，在相同條件 (37℃ , 5%CO 2) 下 , 進行無血清培養。結果與討論，繼Green等，以3T3細胞為滋養層成功地培養了人角朊細胞之后，Boyce 等，采用無滋養層，無血清培養技術，在體外成功地培養了人表皮角朊細胞，并由此而開發出角朊細胞無血清培養 基MCDB153。此培養基中鈣離子濃度較低 (0106mm o l L ) 角朊細胞在此培養基中呈現出基底細胞形狀，以單層方式向外生長，不能成層，細胞之間缺 乏橋粒連接，不能形成表皮片。將體外分離的角朊細 胞接種在塑料培養皿上，在MB培養液中培養，4h 后，角朊細胞開始貼壁 , 24h 后 , 大部分貼壁，72h 后 , 可見到角朊細胞能以單個細胞為克隆 , 以單層形 式生長。10d 左右長滿單層 ，可傳代。與原代培養的 角朊細胞相比 , 傳代后的角朊細胞更易貼壁和增殖。培養7d長滿單層，可再行傳代。