免疫（共）沉淀（IP/CoIP）試劑盒常見問(wèn)題匯總

Q：步驟上的可選步驟能否省略？

A：該試劑盒是經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的，再進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的時(shí)候?qū)嶒?yàn)室都是要做這個(gè)可選步驟的，建議不要省略，按照說(shuō)明書操作。

Q：protein A和protein G beads怎么選？

A：各5ul就可以了

Q：超聲破碎冰上操作是必須的嗎？4℃條件能否微調(diào)？

A：建議冰上操作，4℃是可以微調(diào)的。

Q：beads出現(xiàn)吸不出來(lái)的情況，怎么處理？

A：吸之前需注意槍頭要剪一下再吸，如若beads吸不上來(lái)，可加入等體積的20%乙醇混勻后再吸。

Q：如果沒(méi)有超聲破碎儀的話，能不能用酶解的辦法破碎細(xì)胞？

A：酶解和超聲都是可以的，酶的濃度按照正常實(shí)驗(yàn)室使用濃度就可以。

Q：實(shí)驗(yàn)的時(shí)候能抗體beads一起加嗎？還是先加抗體再加beads？

A：都可以，建議參考說(shuō)明書使用，先加抗體再加beads。

Q：washing buffer一定要使用配套的嗎？

A：zui終濃度是稀釋的1*的washing buffer都可以。

Q：怎么看出現(xiàn)的條帶結(jié)果？

A：比較關(guān)注的就是三個(gè)泳道，input和IgG以及檢測(cè)互相作用的泳道，理論上input有一條目的條帶，IgG沒(méi)有條帶。如果input沒(méi)有條帶，說(shuō)明在進(jìn)行免疫共沉淀之前沒(méi)有進(jìn)行WB驗(yàn)證，建議先驗(yàn)證之后再?gòu)念^做。IgG陰性對(duì)照出現(xiàn)條帶的話是不正常的，應(yīng)該是受重鏈和輕鏈的影響，說(shuō)明使用的二抗不正確，建議更換特異性更強(qiáng)的二抗。

Q：免疫共沉淀試劑盒裂解液能用于組織嗎？比例又是如何？

A：可以的，不過(guò)要事先將組織研磨成勻漿，比例和細(xì)胞比例一致。

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