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                免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒常見問題匯總

                更新時間:2018-02-24      點擊次數:8345

                Q:步驟上的可選步驟能否省略?

                A:該試劑盒是經過實驗驗證的,再進行驗證實驗的時候實驗室都是要做這個可選步驟的,建議不要省略,按照說明書操作。

                 

                Q:protein A和protein G beads怎么選?

                A:各5ul就可以了

                 

                Q:超聲破碎冰上操作是必須的嗎?4℃條件能否微調?

                A:建議冰上操作,4℃是可以微調的。

                 

                Q:beads出現吸不出來的情況,怎么處理?

                A:吸之前需注意槍頭要剪一下再吸,如若beads吸不上來,可加入等體積的20%乙醇混勻后再吸。

                 

                Q:如果沒有超聲破碎儀的話,能不能用酶解的辦法破碎細胞?

                A:酶解和超聲都是可以的,酶的濃度按照正常實驗室使用濃度就可以。

                 

                Q:實驗的時候能抗體beads一起加嗎?還是先加抗體再加beads?

                A:都可以,建議參考說明書使用,先加抗體再加beads。

                 

                Q:washing buffer一定要使用配套的嗎?

                A:zui終濃度是稀釋的1*的washing buffer都可以。

                 

                Q:怎么看出現的條帶結果?

                A:比較關注的就是三個泳道,input和IgG以及檢測互相作用的泳道,理論上input有一條目的條帶,IgG沒有條帶。如果input沒有條帶,說明在進行免疫共沉淀之前沒有進行WB驗證,建議先驗證之后再從頭做。IgG陰性對照出現條帶的話是不正常的,應該是受重鏈和輕鏈的影響,說明使用的二抗不正確,建議更換特異性更強的二抗。

                 

                Q:免疫共沉淀試劑盒裂解液能用于組織嗎?比例又是如何?

                A:可以的,不過要事先將組織研磨成勻漿,比例和細胞比例一致。

                 

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                   abs955   免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒   50tests

                 

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